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标题: exo uptake实验，如何去除残余染料 [打印本页]

作者: wenzhouzsl 时间: 2015-7-2 09:51
标题: exo uptake实验，如何去除残余染料
各位大侠，最近要做exo 摄取实验，首先要用PKH67标记exosome，然后去除多余染料。文献报道去除残余染料，可用超速离心的方法，可我们没有超速离心机。
还有一篇文章，用的是7kDa的脱盐柱，可是脱盐柱没用过啊。
做过该实验的大侠，还有其他方法吗？

作者: 惜名 时间: 2015-7-2 10:03
一篇JCI用0.5%的BSA中和染色结束的混合液，这个步骤就是去除多余染料的么？

作者: wenzhouzsl 时间: 2015-7-2 10:08

惜名发表于 2015-7-2 10:03
一篇JCI用0.5%的BSA中和染色结束的混合液，这个步骤就是去除多余染料的么？

嗯，文献中说PKH-67染完是要用BSA中和，但是还说要超速离心，不知道BSA是否能彻底去除残余染料？

作者: 惜名 时间: 2015-7-2 10:19

wenzhouzsl 发表于 2015-7-2 10:08
嗯，文献中说PKH-67染完是要用BSA中和，但是还说要超速离心，不知道BSA是否能彻底去除残余染料？ ...

超速离心当然要的，这就是重新提取exo的过程啊。
至于是否能彻底去除，我觉得应该是可以的吧。我做过3次，都是用这个方法，出来的免疫荧光图还蛮好的。

作者: wenzhouzsl 时间: 2015-7-2 14:05

惜名发表于 2015-7-2 10:19
超速离心当然要的，这就是重新提取exo的过程啊。
至于是否能彻底去除，我觉得应该是可以的吧。我做过3次 ...

谢谢您。
我们学校这里没有超速离心机，现在只能用脱盐柱了。不知道效果如何？
超离应该还是最经典的方法。

作者: hzangs 时间: 2015-7-2 22:19
Izon 公司目前有一款凝胶排阻柱子可以用来分离exosome。我感觉你可以尝试用他们家的柱子做一次纯化试一试，相当于从样品里回收exosome，也许可以达到你去除多余燃染料的目的。

作者: wenzhouzsl 时间: 2015-7-3 16:18

hzangs 发表于 2015-7-2 22:19
Izon 公司目前有一款凝胶排阻柱子可以用来分离exosome。我感觉你可以尝试用他们家的柱子做一次纯化试一 ...

好的，谢谢您的建议。

作者: TiTi 时间: 2015-7-4 14:01
要彻底去除PKH67需要蔗糖密度离心，因为PKH会自发形成胶束。
用Exo-quick来除可能也可以，但也要若干次，而且暂无文献支持

作者: shenia 时间: 2015-7-9 09:28
我也是用Exo-Quick重新提取一次，可以加个染料组的阳性对照，看还可以看出摄取的效果的

作者: hereissyk 时间: 2015-7-22 14:42
马克，感觉要用

作者: 子非鱼 时间: 2015-12-11 20:57
刚开始做，看到什么都感觉很有用！

作者: moa528 时间: 2017-7-21 14:39
你好，问题解决了，我们实验室也是没有超速离心机，如何去除多余的染料的啊

作者: 15122392869 时间: 2018-5-11 22:17
请问是哪篇文献呢？

作者: ylj0922 时间: 2019-3-5 17:26
MARK,MARK,MARK

作者: ffzhao 时间: 2019-4-17 10:29
用浓缩柱，100kd，大体积多次洗，很干净，可以用flowthrough当对照，

作者: flowers17 时间: 2019-5-27 16:27
可以用100KDa的超滤管代替色谱柱吗

作者: luhui7 时间: 2022-2-25 21:59
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作者: Tipton 时间: 2023-5-5 14:56
收藏了markmark

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