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标题: 本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度 [打印本页]
作者: jianwen 时间: 2016-3-10 00:39
标题: 本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度
400ml血浆分离出的外泌体，
1、往外泌体沉淀中加入1ml Trizol，混匀（反复吹打或涡旋），4℃放置10min。
2、按比例（1ml Trizol：200ul氯仿）加入氯仿200ul，剧烈振荡，4℃放置15min。
4、4℃ 12000×g离心15min。
5、吸取上层水相至新EP管（350ml）。
6、按比例（1ml Trizol：500ul异丙醇）加入异丙醇500ul，混匀，4℃放置10min。
7、4℃ 12000×g 离心10min，弃上清，RNA 沉于管底。
8、按比例（1ml Trizol：1ml 75%乙醇）加入75%乙醇1ml，温和振荡。
9、4℃ 12000g 离心 5min，尽量弃上清（重复75%乙醇洗涤一次）。
10、室温晾干。
11、加用5ulRNA溶解液溶解沉淀RNA。
所测RNA浓度：50多ug/ml
作者: hzangs 时间: 2016-3-10 19:12
楼主 400ul血浆吧？
作者: jianwen 时间: 2016-3-10 19:46
不好意思，打错了，是400ul。
感觉提取的RNA浓度比较低。后面用800ul提取的外泌体送去做高通量测序结果也差，说RNA浓度太低了
作者: ashey 时间: 2016-3-13 21:30
life不是有专门的提取exosome RNA的试剂盒吗？有没有尝试下看看结果如何？exosome中RNA可按照细胞RNA提取步骤吗？会不会有影响？
作者: Bridgen桥生物 时间: 2016-3-15 22:30
用一般的试剂盒提取出的外泌体很难提到完整的外泌体，可通过颗径分析知道自己提出的是否完整，数量多少。
作者: 胖子的心境 时间: 2016-3-21 10:05
50ug/ml，只用了5ul的水溶解？量这么少吗。新手问问
作者: zzy 时间: 2016-5-11 15:09
楼主，血浆还是血清？
作者: jianwen 时间: 2016-5-19 16:47
用的血浆，最近在做血清的
作者: jianwen 时间: 2016-5-19 16:48
确实好少，还在摸索中
作者: jianwen 时间: 2016-5-19 16:49
检测了浓度和大小，还可以
作者: jianwen 时间: 2016-5-19 16:50
有些文献是用Trizol的，还要用专门试剂盒的，这个只是先测下看看
作者: wxy 时间: 2016-6-6 20:38
楼主，前一段时间我手工提exosomes中的总RNA浓度跟你一样，不知道你现在有解决的办法了么
作者: jianwen 时间: 2016-6-21 08:46
最近我又试了次，用TRIZOL提取浓度还是一样，但发现直接提取血浆的RNA浓度是外泌体的十多倍。公司是用专门提miRNA的试剂盒提的，浓度确实高些
作者: 一口润心田 时间: 2016-8-4 11:10
用的是trizol，不是trizol ls吗？另外楼上说的exosome RNA试剂盒楼主后来有尝试吗
作者: 芋仔61 时间: 2016-10-27 12:49
楼主你好，我们也是用life外泌体提取试剂盒，所得外泌体沉淀特别大，难以重悬，导致TRIZOL裂解不完全。请问楼主遇到这种问题吗，如何解决？
看楼主提出来的浓度确实很高呢，是用什么方法测定的浓度？onedrop吗？有没有做A2100检测呢？
作者: konggy 时间: 2016-11-14 15:44
有试过用测序来做后续的工作吗。
作者: luchuan100 时间: 2017-9-18 10:18
作者: xihuniao123 时间: 2018-12-11 15:31
血浆不太好做，如果要想浓缩一下浓度，可以用BIOG血浆富集RNA提取方法，可以提高浓度，一般血浆1ml以上结果好一些。
作者: peggy4598690 时间: 2019-2-11 13:38
想请问楼主您的步骤是参考哪一份文献？谢谢
作者: peggy4598690 时间: 2019-2-11 14:19
请问楼主最近血清的结果也做出来了吗?量也还是这么少吗?
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