外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 有没有用过Abcam的CD63抗体，来交流一下WB [打印本页]
作者: Aoterdong    时间: 2014-12-19 16:28
标题: 有没有用过Abcam的CD63抗体，来交流一下WB
RT,大家跑WB的时候用的是还原性的loading buffer还是非还原性的loading buffer？
作者: lonelyzhi    时间: 2014-12-23 13:40
用的是Santa的。。。。。
作者: langlang007jj    时间: 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次都没出，目前刚订了碧云天的非变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X)，打算试一试，然后跟大家交流。
作者: rubisco    时间: 2015-1-18 22:25
买了ABCAM的，但是还没有用，如果用细胞培养上清来做，大家一般用多少ml的上清来提取exosome？
作者: zjm337    时间: 2016-9-26 11:15
langlang007jj 发表于 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次 ...

你好，我用WB表征外泌体上的CD63，外泌体条带很明显，为什么细胞裂解没有跑出条带？？？
作者: kao3234659    时间: 2017-2-14 06:00
一定要用非还原性，如果PELLET不是很大，最好不要煮样，室温溶解就好。
作者: cj15521115192    时间: 2017-4-20 18:40
langlang007jj 发表于 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次 ...

试出来了吗？ 结果怎么样
作者: zhixiarensheng    时间: 2017-4-27 20:07
kao3234659 发表于 2017-2-14 06:00
一定要用非还原性，如果PELLET不是很大，最好不要煮样，室温溶解就好。

您好，请问您分离出的exosomes是用什么裂解的？需要裂解液裂解吗？还是直接加loading 煮过后跑western blot
作者: kao3234659    时间: 2017-5-6 21:35
zhixiarensheng 发表于 2017-4-27 20:07
您好，请问您分离出的exosomes是用什么裂解的？需要裂解液裂解吗？还是直接加loading 煮过后跑western bl ...

加loading直接跑。
作者: zhixiarensheng    时间: 2017-5-10 21:52
kao3234659 发表于 2017-5-6 21:35
加loading直接跑。

您好，我加loading直接跑的后蛋白几乎成一片了 ，怎么回事？2017-05-09_11-03-21 CD63 ...tif
作者: 大鹏子    时间: 2017-5-19 18:46
langlang007jj 发表于 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次 ...

你好，请问怎么看抗体需要用还原性还是非还原性的loading buffer呢？
作者: foryourj    时间: 2017-9-25 16:17
zjm337 发表于 2016-9-26 11:15
你好，我用WB表征外泌体上的CD63，外泌体条带很明显，为什么细胞裂解没有跑出条带？？？ ...

您好，请问，你用的哪家公司的抗体？
作者: foryourj    时间: 2017-9-25 16:18
langlang007jj 发表于 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次 ...

你好，麻烦请问哈，你试出来了吗？
作者: 胡杨    时间: 2017-11-24 10:18
大鹏子 发表于 2017-5-19 18:46
你好，请问怎么看抗体需要用还原性还是非还原性的loading buffer呢？

你好，这个问题你得到答案了吗？因为抗体是师姐买的，我不知道。
作者: Dr.yu    时间: 2017-11-24 11:07
前两天用Abcam的CD63跑了一次细胞的Western，外泌体加裂解液或者不加裂解液都可以，我两个都试了，跑出来的结果一样，至于Loading buffer用普通的就能跑出来，我跑的细胞总蛋白CD63表达很低，趋近于没有
作者: ucsandiego    时间: 2017-12-7 10:53
大神在吗，我也用的abcam的CD63什么都跑不出来，我的cd9也是abcam的效果很好，但是我用的是还原性的loading buffer，您现在跑出条带了吗，怎么改进的呢
作者: ucsandiego    时间: 2017-12-7 12:12
langlang007jj 发表于 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次 ...

您好，您的CD63跑出来了吗，我看见那个抗体说明书也没有说要用非还原条件啊
作者: vivelarye    时间: 2017-12-22 16:12
ucsandiego 发表于 2017-12-7 10:53
大神在吗，我也用的abcam的CD63什么都跑不出来，我的cd9也是abcam的效果很好，但是我用的是还原性的loading ...

请教下，我用的abcam的CD9效果就不好，外泌体没有，细胞有条带。。能分享下你的经验么
作者: ucsandiego    时间: 2018-1-7 13:53
vivelarye 发表于 2017-12-22 16:12
请教下，我用的abcam的CD9效果就不好，外泌体没有，细胞有条带。。能分享下你的经验么 ...

我就是标准流程做的，坑能使我们的外泌体不同吧
作者: Exosomeslover    时间: 2018-3-4 15:44
zjm337 发表于 2016-9-26 11:15
你好，我用WB表征外泌体上的CD63，外泌体条带很明显，为什么细胞裂解没有跑出条带？？？ ...

你好老师，我想问一下我做的结果也是cd63在外泌体中表达而在细胞裂解中表达，我也看了几篇文献，结果也是这样，但是都没有相关的讨论及解释，请问您有相关的文献支持吗，这个问题太困扰我了。
作者: 阿赵    时间: 2018-3-20 10:58
请问一下各位，你们的ABCam加CD63和CD9的抗体是用的哪个货号的呀？ 新手，第一次做，看了好多文献都没有写明。所以求助大家 ，谢谢了。
作者: 外泌体小天使    时间: 2018-4-17 08:56
阿赵 发表于 2018-3-20 10:58
请问一下各位，你们的ABCam加CD63和CD9的抗体是用的哪个货号的呀？ 新手，第一次做，看了好多文献都没有写 ...

你可以去Abcam官网查询啊，那里都有的，实在不行 你跟艾博抗的技术打电话，让他们给你找，更简单。
作者: 805580262    时间: 2018-11-6 10:31
Dr.yu 发表于 2017-11-24 11:07
前两天用Abcam的CD63跑了一次细胞的Western，外泌体加裂解液或者不加裂解液都可以，我两个都试了，跑出来的 ...

您好，请问你是用细胞上清还是血清提的外泌体呢？
作者: bokelu    时间: 2019-3-19 10:08
CD63的抗体用了好几个，ABCam的质量最好，novus的也不错，就是R&D的最差。买的时候注意产品是否被其他文献引用过，引用多的就验证得多，效果有保障。
作者: 邱邱--    时间: 2019-3-25 19:00
我用的是这个抗体，结果时好时坏的，有时候的条带很好看，有时候又不行，感觉还是样品的问题，请问一下你是用什么方法提的外泌体，提完之后用的什么方法提蛋白啊，一抗是用什么稀释的？我是用的5%的BSA，可是我看说明书使用0.05%BSA
作者: Holic    时间: 2019-10-28 11:49
langlang007jj 发表于 2014-12-24 10:52
我用的也是Abcam的CD63抗体，之前没注意到要用非还原性的loading buffer，跑细胞总蛋白作为阳性对照三四次 ...

你好同学，你用非还原性buffer跑出来了吗？



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3