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标题: 求助：血清外泌体提取250ng，跑电泳啥也没有...没有... [打印本页]
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-4 18:25
标题: 求助：血清外泌体提取250ng，跑电泳啥也没有...没有...
本帖最后由 子非鱼 于 2016-5-4 22:20 编辑

RT,SBI提取250ul血清的exo后，60ulPBS溶解后冻存在-80℃，最近拿出来提了RNA，测浓度后总量250ng，但跑电泳后什么也没有，没有条带！！但是同时提取的细胞和组织都有明显的条带，我知道exo和cell、tissue的RNA条带模式不一样，但是应该在20-200之间有个条带吧，但是什么也没有，有可能被降解完吗？可是exo不是相对稳定的吗？难道一开始提出来就加TRIZO吗？或者250ng对于跑电泳量来说还是太少？。。走过的路过的赶紧来指点迷津啊
作者: hzangs    时间: 2016-5-4 21:11
电泳检测RNA  灵敏度非常差……    没有意义的。
你可以考虑逆转录一些，然后跑几个PCR  看看能不能克隆到一些已知的基因。
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-4 22:23
hzangs 发表于 2016-5-4 21:11
电泳检测RNA  灵敏度非常差……    没有意义的。
你可以考虑逆转录一些，然后跑几个PCR  看看能不能克隆到 ...

我们准备做exo内miRNA芯片，筛选差异性exosomal miRNA，公司要求我们跑电泳图看看我们提出来的exo-RNA质量，结果一跑电泳，心都凉了...
斑竹的办法我试试...
作者: hzangs    时间: 2016-5-5 00:50
子非鱼 发表于 2016-5-4 22:23
我们准备做exo内miRNA芯片，筛选差异性exosomal miRNA，公司要求我们跑电泳图看看我们提出来的exo-RNA质 ...

一般小RNA电泳不用琼脂糖胶
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-5 15:39
hzangs 发表于 2016-5-5 00:50
一般小RNA电泳不用琼脂糖胶

那用什么胶？
作者: hzangs    时间: 2016-5-5 18:01
子非鱼 发表于 2016-5-5 15:39
那用什么胶？

PAGE胶
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-5 19:20
本帖最后由 子非鱼 于 2016-5-5 19:22 编辑
hzangs 发表于 2016-5-5 18:01
PAGE胶

斑竹，V5~~我刚问了下我们这里表观遗传学的人，和您说的一样！膜拜~~，幸亏问了，不然我就在错误的道路上越走越远了.......
作者: DogGuo    时间: 2016-5-5 21:23
PAGE胶怎么检测？有具体方法么？
作者: hzangs    时间: 2016-5-5 22:55
DogGuo 发表于 2016-5-5 21:23
PAGE胶怎么检测？有具体方法么？

这个  随便百度  或者 必应  或者 谷歌    都可以找到。 我这里没有现成的protocol
作者: 乌克丽丽的橙子    时间: 2016-8-31 17:33
版主V5
作者: Peter_chen    时间: 2017-5-19 09:53
不知道你是用什么方法定量的，250uL的血清里的外泌体是提不到250ng的RNA的，建议你跑个安捷伦2100的RNA PICO 6000芯片
作者: wweeii0306    时间: 2017-6-14 17:12
我们外泌体RNA测序从来不跑电泳的，直接上2100质检，有峰就可以开始建库测序了~外泌体的RNA本来就少，电泳不灵敏，不一定能看见。
作者: husthuagai    时间: 2017-6-29 00:56
凯杰提取体液外泌体RNA的试剂盒，2ml血液大概只能提取10-20ngRNA（他们技术也是得到这个量），楼主不到1ml就能得到250ng？这个量好大
作者: schs1985    时间: 2017-7-13 15:11
楼主不会是用的nanodrop测的RNA浓度吧？对于低浓度的RNA，nanodrop很不靠谱的
作者: afra    时间: 2017-8-7 09:48
乌克丽丽的橙子 发表于 2016-8-31 17:33
版主V5

请问一下您,跑了PAGE了没？
作者: 深呼吸的行者    时间: 2017-8-17 21:37
wweeii0306 发表于 2017-6-14 17:12
我们外泌体RNA测序从来不跑电泳的，直接上2100质检，有峰就可以开始建库测序了~外泌体的RNA本来就少，电泳 ...

前辈你好，方不方便告诉一下你们外泌体是如何提取的？我们提出来的外泌体RNA总量总是达不到建库要求，有什么办法吗？跪求前辈指点
作者: 子非鱼    时间: 2018-2-15 11:31
刚看到留言，统一回复：250ul血清确实提取不到那么多RNA，之前检测存在错误。我们后来用1ml的血清提取外泌体，试剂沉淀法提取，然后Qiagen RNA试剂盒提取RNA，有250-400 ng。



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