外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 关于外泌体提取量的几个问题 [打印本页]

作者: 陆峰彬    时间: 2016-5-8 16:18
标题: 关于外泌体提取量的几个问题
刚接触外泌体,希望前辈们指教,谢谢!我的问题:
1、文献中提到细胞饥饿处理24或48小时,请问这两者对外泌体的提取量有什么区别,如果没有区别,那能否饥饿处理两次,收集两次上清液,别怪我这么抠,由于提间充质干细胞的外泌体做小鼠实验,所以需要量比较多!
2、论坛中有前辈,用去外泌体的FBS培养细胞,那去外泌体FBS超速离心的FBS浓度可以用纯FBS或者10%FBS?
3、如果用去外泌体的FBS培养细胞,那能否重复利用细胞提外泌体?提的问题比较多,请见谅!

作者: appleseed    时间: 2016-5-8 22:31
帮顶,我也新手刚接触这个
作者: lenoch    时间: 2016-5-11 12:43
饥饿时间越久,细胞当然产生的exosome量越多,所以48h个人感觉比24小时好,MSC耐饿,但是饿了之后细胞状态会很差。如果你觉得好的话可以重复利用试试,记得告诉我。
超离后的FBS你就把它当做FBS,该怎么加就怎么加。但是根据我的观察,用沉淀法提取的你会发现加了血清的上清有大量沉淀,别高兴,那是大量的蛋白。真正超离提纯之后你会发现exosome量饥饿后产生的明显多。但是,问题在于饥饿和不饥饿对exosome的内含物有没有影响????
可以重复利用,问题在于有血清长48小时很多细胞会把自己挤死了。尤其是商品化的细胞。原代细胞会好一些。因此建议你趁细胞60-70%或者估算着48h后刚好长满的时候加入无exo血清的培养基。这样细胞48h后刚好可以长满,再重复传代,一举两得。
作者: qyjinghui    时间: 2017-8-22 17:57
lenoch 发表于 2016-5-11 12:43
饥饿时间越久,细胞当然产生的exosome量越多,所以48h个人感觉比24小时好,MSC耐饿,但是饿了之后细胞状态 ...

老师您好,咨询个问题,我们打算比较药物处理后细胞产生外泌体的内容物变化,用药物处理2天后,细胞已经长满了,这时候我是应该把培养液收集起来,还是应该加新鲜培养液继续培养2天后收集呢?之所以考虑后者是想彻底排除上清中残留药物对结果的影响。但是细胞在药物处理完就已经长满了,需要传代后再收集?请您指点一二,谢谢。




欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3