外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 外泌体电镜鉴定 [打印本页]

作者: muzi.csu    时间: 2015-2-4 11:05
标题: 外泌体电镜鉴定
感觉电镜结果怪怪的,我看好多人的电镜图都是单个的,但是我的怎么是好几个在一个囊泡里面一样的,这个是外泌体么...


作者: lwj7853    时间: 2015-2-4 12:44
TEM还是SEM?感觉真像聚团了,大小正确吗?
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-4 16:51
Johnny 发表于 2015-2-4 12:14
没有标尺。。。可能是exo聚集成团了吧

我只截了一部分,回复里面不知道再怎么放图片了....不过上面那个图是500nm的标尺...成团会不会跟我送去做电镜的样本有关呢,我是在EP管里直接固定exosome的沉淀送去电镜室的
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-4 16:54
lwj7853 发表于 2015-2-4 12:44
TEM还是SEM?感觉真像聚团了,大小正确吗?

是做的透射电镜,大小的话觉得比较小额...感觉<50nm的比较多
作者: liuzhen200892    时间: 2015-2-5 11:00
请问,做外泌体电镜,应该怎么准备材料?因为是要到年后才能排上,我想把样本先送到电镜室,但是那边没有-80冰箱。
不知道外泌体在4度下可以保存多久?要不要什么特殊处理?
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-5 14:19
liuzhen200892 发表于 2015-2-5 11:00
请问,做外泌体电镜,应该怎么准备材料?因为是要到年后才能排上,我想把样本先送到电镜室,但是那边没有-8 ...

我们这边是电镜室给的固定液,提出来外泌体之后,直接用固定液固定沉淀,放在4°冰箱,排队等着,好像固定后能够放挺久的,然后还有的是直接送PBS悬液过去,不过这个我不是很清楚了
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-5 14:22
Johnny 发表于 2015-2-4 20:17
<50nm是略小了点。要判定的话,结合WB、nanosight吧

恩啊.......
作者: liuzhen200892    时间: 2015-2-7 15:26
muzi.csu 发表于 2015-2-5 14:19
我们这边是电镜室给的固定液,提出来外泌体之后,直接用固定液固定沉淀,放在4°冰箱,排队等着,好像固 ...

直接用戊二醛固定液固定吗?我现在的是已经解冻了,暂时做不了。我直接再冻住没关系吧?
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-9 10:29
liuzhen200892 发表于 2015-2-7 15:26
直接用戊二醛固定液固定吗?我现在的是已经解冻了,暂时做不了。我直接再冻住没关系吧? ...

(⊙o⊙)…这个我不是很清楚额
作者: 苏静    时间: 2015-3-4 18:40
用之前稍微超声一下会好一些
作者: 微泡biomarker    时间: 2015-3-30 20:41
我也想做电镜,现在就是在样品准备上面出了问题,请问一下 你这个电镜的样品前处理是怎么做的啊 ,我上次直接PBs重悬后 铜网上点样,风干后 出来的都是 圆圈状的上面有个黑色的点,不知道为什么?请大家给分析一下。
作者: fengshilou    时间: 2015-4-13 23:12
muzi.csu 发表于 2015-2-5 14:19
我们这边是电镜室给的固定液,提出来外泌体之后,直接用固定液固定沉淀,放在4°冰箱,排队等着,好像固 ...

这个方法挺好的,可以借鉴下
作者: fengshilou    时间: 2015-4-13 23:14
微泡biomarker 发表于 2015-3-30 20:41
我也想做电镜,现在就是在样品准备上面出了问题,请问一下 你这个电镜的样品前处理是怎么做的啊 ,我上次 ...

我们的也是啊,同感
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-4-21 08:14

作者: nene    时间: 2015-4-21 10:43
请问,这是用什么方法提取的exosome? PBS不很清楚。kit的保存液应该是4度2星期问题不大
作者: muzi.csu    时间: 2015-4-27 12:46
我是用SBI的试剂盒分离的外泌体,没做什么处理,就是分离后把固定液直接加到管子里了。
作者: wenzhouzsl    时间: 2015-4-28 19:16
大师们,exosome电镜观察样本制备,看了几篇硕士论文说exosome溶解于液体后直接滴于铜网上,然后加醋酸铀染色,上机。
说的很简单哦。
可是我今天问了另外一位同学,做电镜做了一年,他是做蛋白的,他的经验是铜网最好做亲水化处理。
这一步是不是很关键啊?
作者: meme    时间: 2015-10-22 15:13
苏静 发表于 2015-3-4 18:40
用之前稍微超声一下会好一些

你好,外泌体做电镜之前还是可以超声的呀?
作者: wanghx_85    时间: 2015-10-22 23:34
我做的电镜图片和你的差不多,不过稍微好点儿,能看到单个囊泡,这应该是成团了,再提醒你一句保护好你的图片,防止被盗用
作者: 苏静    时间: 2015-11-11 22:00
meme 发表于 2015-10-22 15:13
你好,外泌体做电镜之前还是可以超声的呀?

可以稍微超声一下,也可以不超声。
作者: w403185742    时间: 2015-12-17 16:57
你好,我是初做外泌体的菜鸟,我也遇到了外泌体抱团的情况,请问这个问题你解决了吗?
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-19 15:30
muzi.csu 发表于 2015-4-27 12:46
我是用SBI的试剂盒分离的外泌体,没做什么处理,就是分离后把固定液直接加到管子里了。 ...

你好!我也是用SBI试剂盒提取外泌体(血清和细胞的都有),做了两次TEM,聚焦不清楚,电镜老师说我制样的问题,想和楼主交流一下:楼主用SBI提取外泌体的量有多少?固定前溶在多少的PBS里?有没有做过血清外泌体的提取,然后多少血清提取,之后多少PBS溶,TEM结果好不好?想有个漂亮的TEM图,好难啊.....
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-19 15:31
muzi.csu 发表于 2015-4-27 12:46
我是用SBI的试剂盒分离的外泌体,没做什么处理,就是分离后把固定液直接加到管子里了。 ...

话说:我两次TEM前都没固定.....不造是不是这个问题.....
作者: muzi.csu    时间: 2016-7-6 20:37
wanghx_85 发表于 2015-10-22 23:34
我做的电镜图片和你的差不多,不过稍微好点儿,能看到单个囊泡,这应该是成团了,再提醒你一句保护好你的图 ...

好久没登了,谢谢
作者: muzi.csu    时间: 2016-7-6 20:38
w403185742 发表于 2015-12-17 16:57
你好,我是初做外泌体的菜鸟,我也遇到了外泌体抱团的情况,请问这个问题你解决了吗? ...

没有解决  后来
作者: muzi.csu    时间: 2016-7-6 20:39
子非鱼 发表于 2016-5-19 15:30
你好!我也是用SBI试剂盒提取外泌体(血清和细胞的都有),做了两次TEM,聚焦不清楚,电镜老师说我制样的 ...

我的挺多外泌体的,肉眼可见沉淀,沉淀直接固定液固定的,我做的是细胞上清的(⊙o⊙)…




欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3