外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 血清离心去除外泌体的方法及用该血清配置的培养基的培... [打印本页]
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-22 11:23
标题: 血清离心去除外泌体的方法及用该血清配置的培养基的培...
用细胞培养上清提取外泌体，需用不含外泌体的血清，一般先离心处理血清。文献报道的方法不一，我看到的用的比较多的方法是 110000g，12h。但是没有介绍离心之后具体的处理方法，比如丢弃多少沉淀？可以直接倾倒收集上清吗？还是要用移液器慢慢转移？  此外，因为离心血清费时耗力，培养细胞的时候是不是可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用离心过的血清配置的培养基呢？

请各位大侠不吝赐教！
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-22 20:41
自己顶一下！
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-25 11:24
再顶！烦请各位老师解答！
作者: hzangs    时间: 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，  然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌体会在这部分里）， 上清转移到新管子 再过0.45um的滤器除一次菌。 细胞培养的时候   每次铺50%密度的细胞，然后培养72小时收上清，再直接将细胞按50%的密度传代，这样3天收一次，一直使用exosome free的FBS配置的培液。
含有外泌体的那10%的FBS 不要丢弃，怪浪费的。  你可以用来冻存细胞。 如果你有状态不好的细胞 也可以用这个FBS配置的培液养一养试试，  我师弟曾经尝试过，这剩下的10%的FBS 养细胞 细胞状态可好了！！！
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-26 02:01
hzangs 发表于 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，  然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌 ...

你提供的信息太有用了，Thank you very much!
作者: hzangs    时间: 2016-7-26 09:28
下里巴人 发表于 2016-7-26 02:01
你提供的信息太有用了，Thank you very much!

不用客气
作者: Aurorachen    时间: 2016-7-26 16:00
请问可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用exo-free血清配置的培养基吗？
作者: hzangs    时间: 2016-7-26 18:33
Aurorachen 发表于 2016-7-26 16:00
请问可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用exo-free血清配置的培养基吗？
...

可以的。
作者: 免疫小子    时间: 2016-7-26 20:49
hzangs 发表于 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，  然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌 ...

版主老师 你好 鉴于你培养3天的细胞  我觉得还是得看是什么细胞  我体外培养B细胞可撑不到3天  还有就是你培养3天96孔板的话  是多久换一次无Ex的培养液呢
作者: hzangs    时间: 2016-7-26 20:53
免疫小子 发表于 2016-7-26 20:49
版主老师 你好 鉴于你培养3天的细胞  我觉得还是得看是什么细胞  我体外培养B细胞可撑不到3天  还有就是 ...

要看细胞的。 有些细胞根本养不了那么久  所以就要早点收。 我养的tumor cell  还是可以的。 我是用15cm dish 养的， 3天内不换液。
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-27 08:52
Aurorachen 发表于 2016-7-26 16:00
请问可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用exo-free血清配置的培养基吗？
...

我觉得可以，hzangs老师应该也是这个意思。
作者: Aurorachen    时间: 2016-7-27 09:03
hzangs 发表于 2016-7-26 18:33
可以的。

谢谢斑竹大人！
作者: a601686488    时间: 2018-7-23 10:54
hzangs 发表于 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，  然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌 ...

hzang大神你好！！请问你FBS离心后，有没有再去鉴定上清和沉淀的外泌体量呢，或者有没有去通过什么方法，说明离心后血清的上清，外泌体几乎或大部分已经被离心掉了。
作者: 鲍鱼de马甲    时间: 2019-6-11 13:19
hzangs 发表于 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，  然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌 ...

请问hzangs大人，血清超离去除外泌体，用200000g 4h可以吗？
作者: Laide    时间: 2022-12-14 16:57
您好，我想问一下，超速离心FBS时用开口的管子，然后离心完后0.22滤膜过滤后用来培养细胞会出现细胞污染的情况么；还有就是，如果我先配制好了含10%FBS的完全培养基，然后去超离完全培养基去除外泌体这个方案可行么，需要的转速和时间大概是多少呀
作者: 下里巴人    时间: 2024-2-6 19:34
Laide 发表于 2022-12-14 16:57
您好，我想问一下，超速离心FBS时用开口的管子，然后离心完后0.22滤膜过滤后用来培养细胞会出现细胞污染的 ...

就是你描述的这样子。不知道现在回复算不算晚



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3