PKH26和PKH67标记

yuantingdong

请教各位大神几个问题。（1）PKH26和PKH67标记有什么区别？是不是都可以用来标记外泌体？   （2）我看PKH67标记步骤里面有一个BSA 终止染色，这个BSA和配抗体稀释液以及免疫荧光BSA封闭液的BSA相同吗？     （3）PKH67标记步骤中，标记后为什么还要重提外泌体呢？谢谢！       另附一张PKH67标记步骤，大家帮我看看有没有问题，三克油！

惜名

1、颜色的区别，一个红色，一个绿色，看你需要什么颜色。
2、BSA是相同的，但浓度不一样~
3、标记后重提，是因为你你的外泌体被稀释在了“标记液”中，如果你后面做摄取试验，这些标记液被你加到培养基里，不合适吧？

这个步骤没问题。
根据我做了很多次的经验，Diluent C可以少加一些，0.3-0.5ml足以（如果你是土豪，当我没说），相应的，你的PBS-EXO最好能控制在100ul左右。个人经验，供参考~

小李同学

惜名 发表于 2016-10-5 19:46
1、颜色的区别，一个红色，一个绿色，看你需要什么颜色。
2、BSA是相同的，但浓度不一样~
3、标记后重提， ...

大神好，请问小动物活体成像仪观察的话需要用什么染色外泌体呢

weixiao

惜名 发表于 2016-10-21 17:20
如果你再次从PBS里分离exo，就要再次超离了。。。所以，你可以把沉淀直接保存在-80度，不要重悬。或者重 ...

你好，我想问下，如果是这样的话，那么外泌体就没有经过蛋白定量，那么如何确定蛋白上样量了？

今年要发文章啦

重提用超离的方法怎么做呢

阿赵

惜名 发表于 2016-10-5 19:46
1、颜色的区别，一个红色，一个绿色，看你需要什么颜色。
2、BSA是相同的，但浓度不一样~
3、标记后重提， ...

请问这个BSA应该用多少浓度呀？

rcg0516

大神，我想问一下，染完色的外泌体能不能负八十冻存呢？

rcg0516

z6234206 发表于 2018-12-7 13:10
惜名大师，我想问一下，可否外提提完两三天后，再取100ul外泌体做染色？

我也想问呢，这样做可不可以呢？

z6234206

惜名 发表于 2016-10-5 19:46
1、颜色的区别，一个红色，一个绿色，看你需要什么颜色。
2、BSA是相同的，但浓度不一样~
3、标记后重提， ...

惜名大师，我想问一下，可否外提提完两三天后，再取100ul外泌体做染色？

beonlyjk

惜名 发表于 2016-10-13 18:32
PKH26/67原液，肉眼是能看到颜色的，分别是绿色和红色（在荧光显微镜下则分别是红色和绿色）。你染完exo ...

惜名兄，如果染色后重提的外泌体应该看不到颜色，那么按照30ug/100ul的外泌体量，超离后能看到沉淀吗？
（我是用PKH26染色外泌体，具体步骤和楼主基本相近，但是最终超离重提后都会看到明显的红色沉淀。我也尝试过将燃料的量降低到1ul，可是这样的话超离重提后就看不到沉淀了）

walter

惜名 发表于 2016-10-5 19:46
1、颜色的区别，一个红色，一个绿色，看你需要什么颜色。
2、BSA是相同的，但浓度不一样~
3、标记后重提， ...

终止反应的BSA浓度是多少呢？