麻烦大神们鉴定一下电镜图

pytruth

最近从试剂法提取转换到超离法提取外泌体，尝试了从血清和细胞上清里提取外泌体。2ml血清用PBS稀释至12ml、48ml 培液先浓缩成12ml超速离心分离得到的外泌体，重悬于100ul PBS中。

吸取样品20ul 滴加于铜网上沉淀10min，滤纸吸去浮液，吸去醋酸双氧铀10ul滴加于铜网上沉淀90s，滤纸吸去浮液，常温干燥数分钟，上机观察。都是一个个白球，不知道是不是？而且可能由于我提取完之后4度放了三天再做电镜，有点团聚。最近正在赶实验，麻烦各位大神看到了一定给鉴定一下，提提意见!十分感谢！

1

2

3

4

5

6

7

8

9

pytruth

karen 发表于 2016-11-8 19:22
版主好厉害!

刚上手细胞外泌体这块，还是菜鸟，互相学习

pytruth

katekitekite 发表于 2016-11-8 16:33
版主  你浓缩后  用浓缩液稍微吹洗滤膜了么  感觉BCA测浓度差好多

没有，就是尽量吸干净了，因为我感觉100kd的管子浓缩完还比较稀，下回我也试试

katekitekite

hzangs 发表于 2016-11-8 19:15
我是要吹洗的

那以后我就一直吹洗吧  感觉浓度差了一个级别

karen

版主好厉害!

hzangs

katekitekite 发表于 2016-11-8 16:33
版主  你浓缩后  用浓缩液稍微吹洗滤膜了么  感觉BCA测浓度差好多

我是要吹洗的  

katekitekite

hzangs 发表于 2016-11-4 16:18
100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘 ...

版主  你浓缩后  用浓缩液稍微吹洗滤膜了么  感觉BCA测浓度差好多

katekitekite

pytruth 发表于 2016-11-6 15:00
好的，谢谢！

100KD的浓缩可以  可以把很多杂蛋白去掉  所以液体不会变的异常粘稠   我浓缩后用磁珠提纯  量是比较少 不过外泌体还是有的  电镜可以看到   直接样品滴到铜网上   吸附一会  滤纸吸干后 负染色  样品不用固定  

pytruth

hzangs 发表于 2016-11-4 16:18
100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘 ...

好的，谢谢！

hzangs

pytruth 发表于 2016-11-4 15:15
请问师兄有尝试过浓缩了细胞培液之后再超离吗？
是说45ml上清液直接离心要比浓缩后再超离得到的外泌体要 ...

100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘稠