求外泌体western上样量？

xiaodoudou · 发表于 2016-11-15 09:17:24

各位大神，你们跑western的时候，蛋白上样量在什么范围内呢？

peggy4598690 · 发表于 2018-5-10 21:14:16

zhaorui1993 发表于 2018-3-28 15:14
你好，想问一下，你转膜的条件，我一直做不出来，求助

是很一般的western blot，沒什麼特別條件，就是exosome要多收一點，然後用PBS懸浮的時候不要用太多，才不會跑BCA的時候測不到蛋白濃度

zhaorui1993 · 发表于 2018-3-28 15:14:17

peggy4598690 发表于 2017-11-17 02:41
是BCA测出的浓度，我看到有人说外泌体要裂解，有人说不用，好像都跑得出来(我是有裂解的)，我后来用2ug上 ...

你好，想问一下，你转膜的条件，我一直做不出来，求助

peggy4598690 · 发表于 2017-11-17 02:41:40

步步唧唧发表于 2017-11-7 21:04
问一下ug/ml是BCA定的量吧？超离的外泌体要裂解再BCA吗？

是BCA测出的浓度，我看到有人说外泌体要裂解，有人说不用，好像都跑得出来(我是有裂解的)，我后来用2ug上样，有明显CD81条带

步步唧唧 · 发表于 2017-11-7 21:04:08

peggy4598690 发表于 2017-10-17 13:37
请问楼主，我的外泌体超离后浓度极低，只有0.13ug/ml，这样可以使用2ug的上样量吗，会太少吗?
...

问一下ug/ml是BCA定的量吧？超离的外泌体要裂解再BCA吗？

lz93046 · 发表于 2017-11-2 16:14:38

10ul可以的

peggy4598690 · 发表于 2017-10-17 13:37:37

请问楼主，我的外泌体超离后浓度极低，只有0.13ug/ml，这样可以使用2ug的上样量吗，会太少吗?

土豆 · 发表于 2016-11-15 14:18:05

xiaodoudou 发表于 2016-11-15 14:14
thank you . 还有一个问题，我的外泌体提了很久了，-20有两周了，还能用吗？ ...

做WB应该没问题

xiaodoudou · 发表于 2016-11-15 14:14:04

本帖最后由 xiaodoudou 于 2016-11-15 14:16 编辑

thank you . 还有一个问题，我的外泌体提了很久了，-20有两周了，还能用吗？

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-11-15 12:06:27

5-10 ug is enough for the detection of TSG101，CD63，Flotlin 1 in my experiments (using rodent primary astrocytes and neurons).

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