exosome的小鼠实验 我又要重新开始了

hzangs

经过了接近3个月的休整和方案调整。我又要开始跳坑了。我要开始做exosome training 小鼠微环境的动物实验了。上次一口气做了近3个月，每个周分离二百多微克的exosome，这次又要来了。过来立个帖子，激励一下自己!!!





PS:书于2015-7-12    小鼠实验已经结束，通过膝盖处穿刺分别注射高、低转移细胞株分泌的exosome， training小鼠骨微环境，每周2次，一次3ug/只，持续一个月。之后心脏注射中等转移能力肿瘤细胞株构建骨转移模型。追踪转移情况，持续6周。
结果，注射高转移细胞株exosome的一组小鼠转移能力确实比另一组要高一些。但是BLI检测转移信号强度差异在2倍左右，差异倍数过小。因此动物实验提前结束，没有进行后续的继续研究。准备从体外实验入手开始研究exosome是否对转移具有影响。
建议大家以后可以考虑先从体外实验入手，再逐渐上动物实验，可能会更靠谱些。

QWiuei

Based on the assumption that 100 μg of T-exosomes are released to the peripheral tissues continuously, we used 100 μg of exosomes for injection experiments. T-exosomes (100 μg) isolated from TS/A or 4T-1 tumor removed at day 21 post tumor cell injection were injected into BALB/c mice via the tail vein twice weekly for three weeks.请问这个意思是说三周共注射100ug的外泌体吗？.

evomicscience

Your exosome should be labeled using fluorescence or luciferase or others. Otherwise, you will not know how much you dosage into mouse? By the way, protein alone (BAC) is not a reliable method to quantify exosome, specially if your exosome purity is not too high. Labeled exosome (engineering exosome) will help you to get ride of this issue and figure out where the dosage exosome is homing, in liver or tumor or spleen? In addition, how do you dosage exosome? hydrodynamic IV, IP and oral. the routine is issue for dosage. The cell type for exosome production is another issue too. In short, cell type ( immune cell or solid tumor cell), the dosage routine, and labeling exosome should be considerated.
Best, John

hzangs

向荣y 发表于 2015-4-15 14:33
亲 你用于动物实验的外泌体浓度多高啊？一周二百多微升的外泌体需要二百多毫升的上清吧？得养了六七十瓶细 ...

亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞exosomes的，基本上需要15cm dish 20盘-25盘

大琳宝儿

做小鼠？是在体exosome实验吗？那你们有没有从组织中试图提取exosome啊？还是提取exosome回注体内的方法？

hzangs

向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

0.2 ug/ul 也不算低了，100ul 也有20ug了。

我打老鼠  是从尾静脉带进去，每只在2-3ug

13413657252

老师，想请假下，我想做骨髓腔注射，但是感觉里面压力好大打不进去，您一般往骨髓腔内注射多少液体呀？用哪种注射器注射呢？我做的是大鼠

郭密密专用账号

urnotchristina

zhoux18 发表于 2019-9-23 12:47
用0.22um滤膜过滤后再注射动物可以吗？这样可能会损失一些外泌体。请问您是怎样解决这个问题的？ ...

每次都过滤了，后来注射非常缓慢才没有死，或者一次剂量分多次注射，中间歇几分钟

zhoux18

urnotchristina 发表于 2019-8-5 21:38
我们之前尾静脉打外泌体，小鼠也是这样死了，请问你后来怎样解决的？知道是什么原因吗？ ...

用0.22um滤膜过滤后再注射动物可以吗？这样可能会损失一些外泌体。请问您是怎样解决这个问题的？

urnotchristina

markshar 发表于 2017-6-18 00:33
咨询一下，我最近也在尾静脉打外泌体，但遇到一个很严峻的问题，尾静脉打了之后小鼠就开始抽搐然后就挂了， ...

我们之前尾静脉打外泌体，小鼠也是这样死了，请问你后来怎样解决的？知道是什么原因吗？

黄木木

请问有没有人做过给小鼠尾静脉注射外泌体呀？需要保证注射的外泌体完全无菌吗？感觉我们通过超速离心提取的方法很难保证无菌

EVA120120

有直接将外泌体心肌注射的吗？剂量是多少呢？

EVA120120

向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

请问你是用什么方法提取的外泌体？试剂盒还是超速离心？

vivelarye

hzangs 发表于 2018-7-22 22:16
根据自己实验目的来。 我只能告诉你 打进去的外泌体在体内应该几十个小时内就会完全代谢掉。 ...

OK，明白了，谢谢您

hzangs

vivelarye 发表于 2018-7-22 16:49
依然感谢您，这个我还在摸索，体内成像还没上，打算先回输小鼠做个qPCR，想请教您，您一般外泌体回输小鼠 ...

根据自己实验目的来。 我只能告诉你 打进去的外泌体在体内应该几十个小时内就会完全代谢掉。