四度？负八十度？外泌体该这样保存！

Johnny · 发表于 2017-8-23 21:45:22

背景：细胞外囊泡含有细胞来源的生物分子，并且会对微环境变化产生反应。为了对外泌体含量和功能进行可重复的研究，我们需要最好的储存条件以对外泌体完整性造成的影响最小。

目的：比较新鲜分离的外泌体与冷藏或冷冻处理的外泌体的表面性质和蛋白质含量。

方法：立即分析通过差速超速离心纯化的小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）外泌体，或储存在+ 4°C或-80°C的外泌体。通过动态光散射（DLS）、透射电子显微镜（TEM）和电荷密度（zeta电位，ζ）评估外泌体结构。通过无标记的LC-MS/MS鉴定了外泌体蛋白质含量，包括泄漏/解离蛋白质。

结果：新鲜分离的BALF外泌体具有95 nm的平均直径和特征形态。储存对BALF外泌体大小和含量有显著影响。与新鲜相比，储存在+ 4℃的外泌体直径增加了10％，再分布到多分散聚集体并减少了ζ。在-80℃下的储存产生更大的效果，导致直径增加25％，显著降低ζ，导致多层结构的形成。在新鲜的外泌体中，研究人员鉴定出了1140个富含19个基因组本体生物过程的高信度蛋白。在室温下储存后，鉴定出848个蛋白质。在+ 4℃储存的制剂中，与新鲜制备的外泌体洗涤部分相比，上清液部分出现224个蛋白质；这些蛋白质代表外泌体泄漏或松散结合的“外泌体外周”蛋白的解离。在-80℃储存的制剂中，上清液中出现194个蛋白质，表明不同的蛋白质组在不同的储存温度下从外泌体中泄漏出来。

结论：储存影响BALF外泌体的表面特征、形态特征和蛋白质含量。为了保存外泌体蛋白质含量和代表性功能分析，在分离后立即分析外泌体最佳。

不同存储条件对外泌体大小和结构的影响

不同存储条件对外泌体蛋白成分的影响

参考文献：

Maroto R, Zhao Y, Jamaluddin M, Popov VL, Wang H, Kalubowilage M, Zhang Y, Luisi J, Sun H, Culbertson CT, Bossmann SH, Motamedi M, Brasier AR. Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses. J Extracell Vesicles. 2017 Aug 13;6(1):1359478. doi: 10.1080/20013078.2017.1359478. eCollection 2017.

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