有用DIL染料标记外泌体，观察细胞摄取实验的么？

lczyld · 发表于 2017-11-29 09:36:53

有大神用DIL染料标记外泌体，观察细胞摄取实验的么？做过的，一起交流交流呀

可可西里haha · 发表于 2022-6-19 16:13:35

yang 发表于 2017-11-30 22:14
可以染，别超速离心，超滤纯化

请问您说的超滤纯化是使用0.22μm滤膜过滤染色好的外泌体吗

ffzhao · 发表于 2020-3-19 10:44:27

小黄人发表于 2020-1-17 10:09
你好，请问下感染靶细胞您是感染多久呢？外泌体与DiI染色时外泌体有浓度要求吗?与DiI的配比是多少呢？实 ...

我做的是感染靶细胞4小时，随后弃去上清换成培养基，12h或24h即可荧光观察！外泌体浓度我没测，我取20ul用PBS稀释到1ml，加入1ul DIL（DMSO配制1mg/ml）冰上染色20分钟，后面就是浓缩管反复洗涤去除多余DIL，最后再用少量PBS洗一下管内壁，吸出来就是DIL标记的外泌体，后面与DMEM混合就可以感染靶细胞。

小黄人 · 发表于 2020-1-17 10:09:59

ffzhao 发表于 2020-1-13 16:21
外泌体是-80 分装冻存的，Dil染色后（冰上30min）转移到浓缩管，PBS洗后直接感染靶细胞。是标记后立马用 ...

你好，请问下感染靶细胞您是感染多久呢？外泌体与DiI染色时外泌体有浓度要求吗?与DiI的配比是多少呢？实验小白求指教

ffzhao · 发表于 2020-1-13 16:21:17

wwpapple 发表于 2020-1-7 09:12
您好，想请问一下，您用DiI标记过的外泌体有放冰箱储存备用吗？就是标记完可以先储存着，等到用到的时候 ...

外泌体是-80 分装冻存的，Dil染色后（冰上30min）转移到浓缩管，PBS洗后直接感染靶细胞。是标记后立马用，外泌体是不能反复冻融的（膜结构易破）

wwpapple · 发表于 2020-1-7 09:12:52

ffzhao 发表于 2019-10-28 16:34
DIL直接混合染色，随后100KD浓缩管洗涤（从上方多次加入PBS后离心），5-6遍后回收浓缩管里残余的溶液做upta ...

您好，想请问一下，您用DiI标记过的外泌体有放冰箱储存备用吗？就是标记完可以先储存着，等到用到的时候再拿出来吗？还是标记完必须立马用？谢谢，期待您的回复

ffzhao · 发表于 2019-10-28 16:34:50

DIL直接混合染色，随后100KD浓缩管洗涤（从上方多次加入PBS后离心），5-6遍后回收浓缩管里残余的溶液做uptake实验，亲测，好用！

吴绍聪 · 发表于 2019-10-28 14:50:02

DiI我觉得应该要用spin column,不然超离会直接沉淀下来

kevinpw · 发表于 2019-6-18 17:39:27

请教下用10KD的超滤膜过滤纯化的吗？

biqiuchen1 · 发表于 2019-4-12 22:24:40

谢谢你。我回头试试，万分感谢

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有用DIL染料标记外泌体，观察细胞摄取实验的么？

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