外泌体浓度非常非常低

husthuagai · 发表于 2018-1-5 16:31:05

本帖最后由 husthuagai 于 2018-1-5 16:50 编辑

我提取了几次外泌体，使用超速离心的方法。每次测的浓度都是特别低。具体如下：肿瘤细胞200ml培养48h的上清（去除外泌体的10%培养基），2000g 10min去除死细胞，使用超滤管浓缩到25ml，18，000g 20min去除细胞碎片，然后两次12万g 70min，最后离心后，我还是能看到明显的沉淀的，然后我用1ml PBS重悬，最后用0.22um滤器过滤。
这是我的简要步骤。
我在使用0.22滤器前和滤器后测浓度，bca法，分别是0.08ug/ul、0.05ug/ul。这也太低了！！！但是我明明看到沉淀了。这个我已经重复三次了。每次都差不多！
我真的好头痛，这到底是为什么？
求求哪位大神救救我，我真的找不到原因了！
先谢谢！！！

WinterBlinder · 发表于 2021-5-16 20:50:37

感谢分享

芮苏遥 · 发表于 2019-8-12 08:56:08

425612liyuan 发表于 2019-7-18 13:22
后来用了什么方法提高产量的

后来就没有后来啦，因为毕业了。不过现在要重新开始相关课题了。我jio得可以试试挤压制备和牛奶外泌体包装

425612liyuan · 发表于 2019-7-18 13:22:21

后来用了什么方法提高产量的

芮苏遥 · 发表于 2018-5-18 11:54:37

外泌体小天使发表于 2018-4-16 13:57
楼主，请问你的问题解决了吗，外泌体浓度上来了吗？怎么解决的，说下，谢了。 ...

sorry，太久没上来看消息。外泌体浓度跟细胞自身产量有关，我这个基因刚好抑制RAB家族，释放量就会减少，跟对照相比同样处理，离心后就是小小颗沉淀。如果超速离心的话还好，可以合并重悬，试剂盒的话就比较费钱了

外泌体小天使 · 发表于 2018-4-16 13:57:49

芮苏遥发表于 2018-1-10 08:46
还试过9ml，12ml 48h是可以的~延长时间的话，局部就容易干掉了

楼主，请问你的问题解决了吗，外泌体浓度上来了吗？怎么解决的，说下，谢了。

外泌体小天使 · 发表于 2018-4-16 13:56:20

芮苏遥发表于 2018-1-10 08:46
还试过9ml，12ml 48h是可以的~延长时间的话，局部就容易干掉了

楼主，你现在提的怎么样了，浓度上来了吗？

芮苏遥 · 发表于 2018-1-10 08:46:36

SYSUCC-Deng 发表于 2018-1-7 23:56
15cmdish才加12ml培养基吗？太少了吧。

还试过9ml，12ml 48h是可以的~延长时间的话，局部就容易干掉了

cangsongaoxue · 发表于 2018-1-9 15:01:20

我看文献都是100微升的PBS重悬的。

cangsongaoxue · 发表于 2018-1-9 15:00:13

我看文献都是100微升的PBS重悬的。

小朋友玩 · 发表于 2018-1-9 08:41:29

我是在对数生长期开始用无血清的培养基饥饿处理,70毫升上清用100ul重悬,BCA法测的,适当增加了BCA法中的孵育时间

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外泌体浓度非常非常低

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