外泌体蛋白鉴定

胡杨

想请教一下，只跑出来了ALIX和TSG101，加上透射电镜和粒径图，可以证明我提取的是外泌体吗？

cxx123

胡杨 发表于 2018-7-1 20:50
就是和跑外泌体蛋白一样

老师，你好，我想问一下外泌体的标志蛋白跟细胞提的蛋白做对比吗？细胞的蛋白有跑出来吗？怎么衡量你提取的外泌体成功了，因为我细胞跑出来的标志蛋白也比较明显

weixiao

hzangs 发表于 2018-1-25 00:18
可以的。

你好，我想请问下做阳性对照的时候，细胞蛋白上样量是要求和外泌体的量一样吗？那么应该是细胞条带更明显还是外泌体条带更明显了？我用的抗体是CD63和CD9，谢谢解答！

Caro

不好意思各位大神，我想请教几个问题：1、我看有的写做WB验证外泌体标志蛋白的时候，分别要做外泌体和血清，我想问这个血清是同一来源没有提取过外泌体的血清，还是提取外泌体超离时弃掉的上清呀？但是上清里面已经有PBS了呀。2、我用的是患者的血清，比如说一个EP管里可能有500ul~1ml左右，但是我取的时候统一取500ul,那剩下的再冻回-80算不算反复冻融呀？要怎么解决这个问题呢？3、我今天提取血清外泌体，但是NTA得下周一才做，那我是应该放在-80还是4℃，还是说得下次新鲜提取了才能做NTA这次不能做了呢？4、大家每次送电镜，外泌体样本量是多少呀？50ul？

zyy

楼主请问，你的外泌体浓度大概是多少呢，细胞和外泌体的上扬量是一样的吗

mayday0324

hzangs 发表于 2018-11-28 13:42
Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis

好的，非常谢谢老师您啦！老师，目前学生需要回复审稿人一个问题，就是用GAPDH做外泌体和细胞的WB内参，结果外泌体的GAPDH很弱，审稿人要求解释原因，不知该怎么解释，目前也找不到合适的参考文献，卡在这里了，不知老师您能抽空指导下，万分感谢老师您！

hzangs

mayday0324 发表于 2018-11-28 12:49
外泌体蛋白做WB用什么内参基因？

外泌体做WB的内参基因一直存在争议。但是按照David Lyden曾发表于CNS的 ...

Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis

mayday0324

hzangs 发表于 2018-1-25 00:18
可以的。

外泌体蛋白做WB用什么内参基因？

外泌体做WB的内参基因一直存在争议。但是按照David Lyden曾发表于CNS的paper，actin和GAPDH 都可以的。
  老师，您好！请问能把这篇文章发我一下吗？实在没搜到 谢谢啦！老师，我的邮箱是 317192106@qq.com

胡杨

啦啦啦外泌体 发表于 2018-11-5 17:01
求问下阴性对照是怎么设的？用什么样品去设置啊？如果需要提取血浆中外泌体的话。 ...

我没有设置阴性对照，但是看顾一篇文献用的是Histone H3.  文献名字：Selective extracellular vesicle exclusion of miR-142-3p by oral cancer cells promotes both internal and extracellular malignant phenotypes.不过这是细胞来源的外泌体。

啦啦啦外泌体

求问下阴性对照是怎么设的？用什么样品去设置啊？如果需要提取血浆中外泌体的话。

teddy溶溶

hzangs 发表于 2018-1-23 19:44
可以了   最好能再补 CD63 CD9 CD81中的一个。 以及一个阴性对照

你好请问一下，任何的细胞上清液提取的外泌体WB都可以用以上几种吗？