BCA测蛋白浓度问题

kadak007

请教下各位，从约80毫升胰腺癌细胞培养上清（4个大瓶的量）中提取的外泌体（超速离心法），重悬于约100微升1×PBS，做BCA测蛋白浓度时，
取多少体积外泌体重悬液？
用什么样的裂解液？
用多少体积的裂解液？

有没有比较成熟的方案、或者一些指导原则？非常感谢~

kadak007

hexiaoke 发表于 2015-6-2 13:43
不知道楼主后面是怎么做的呢？我也想知道用什么裂解液和取多少体积的裂解液 ...

今天用RIPA裂解液试一下，按1:1加，貌似效果还行

六月の雪

楼主也做胰腺癌？同道中人啊
我用的SBI试剂，用PBS重悬后，取个10-20ul出来加裂解液（因为剩下的还想着孵育其他细胞观察个现象啥的）
BCA测浓度，裂解液不敢加多了，第一次做都是尝试，我用了30ul裂解液（我现在觉得加10ul裂解液都够了= =），测的蛋白浓度挺低的，
这个貌似没有成熟方案吧，都是摸着石头过河，有结果就成~

haoyaying1995

zhangchao 发表于 2020-7-4 18:03
请问裂解液咋配的呀

我用的裂解外泌体的试剂盒

zhangchao

haoyaying1995 发表于 2019-11-14 10:19
你好，问题解决了么？我也遇到同样的问题

方便加个微信么  13844196076  我也做外泌体

zhangchao

六月の雪 发表于 2015-5-29 12:06
楼主也做胰腺癌？同道中人啊
我用的SBI试剂，用PBS重悬后，取个10-20ul出来加裂解液（因为剩下的还想着 ...

请问裂解液咋配的呀

haoyaying1995

wanghx_85 发表于 2015-8-5 09:15
您好，请问您是如何浓缩的？能够发个详细的步骤？还有收集的40度ml的上清是一次性收集？还是多次积攒？多 ...

你好，问题解决了么？我也遇到同样的问题

DBLB

zhoux18 发表于 2019-6-17 17:52
你好，我遇到了同样的问题，请问你解决了吗？BCA浓度低的问题

请问您解决了这个问题了么。BCA检测蛋白浓度低的问题。我试过沸水浴，加碧云天的RIPA裂解，等方法，蛋白浓度还是非常低。我觉得测得的这个数值并不是真实的情况。因为我看文献中别人测得的浓度比我的要低一个数量级，依然有很好蛋白浓度。

DBLB

niceman1987 发表于 2015-5-28 10:53
BCA测蛋白浓度，不应该PBS重悬吧，应该直接加裂解液后检测啊

请教一下，您测出来的蛋白浓度大概在什么范围

zhoux18

exo 发表于 2016-5-27 22:12
目前正在测浓度，方法跟楼主完全一样，浓度测出来极低，不知楼主现在做的怎么样，找到原因了了吗？我一度 ...

你好，我遇到了同样的问题，请问你解决了吗？BCA浓度低的问题

sonja_forever

六月の雪 发表于 2015-5-29 12:06
楼主也做胰腺癌？同道中人啊
我用的SBI试剂，用PBS重悬后，取个10-20ul出来加裂解液（因为剩下的还想着 ...

那请问未裂解的、剩下的Exo悬液你会加蛋白酶抑制剂吗？

grapetian

我用pbs和裂解液都做过，都能检测啊