说超滤离心管能够浓缩细胞培养液

bobo

那么，我看到有的师姐用超速离心管离心DNA，那么exosome算是什么呢，选择的分子量是根据什么选择的呢，离心后，超滤离心管中的exosome用什么重悬呢?

dancing

六月の雪 发表于 2015-5-29 11:54
最早那位哥们提出来用3KD的超滤管，我用的10KD的，这个是截留蛋白的分子量，exosome不算蛋白，反正搞不清具 ...

请问你是按照浓缩之后的体积加的SBI的试剂吗，比如40ml浓缩到了5ml，就加1ml的试剂，对吗

seallin

lenoch 发表于 2016-5-3 20:33
Kit 是按照体积的1/2或者1/10加入的，你的体积10ml浓缩到1ml，肯定可以节省很多Kit。而且效果不受影响。 ...

你说的对，一年前我还不是很懂，哈哈

lenoch

seallin 发表于 2015-5-30 20:00
浓不浓缩再用kit其实差别差不多，难道浓缩了之后可以少用点kit的溶液，如果这样想，那你的结果一定不好 ...

Kit 是按照体积的1/2或者1/10加入的，你的体积10ml浓缩到1ml，肯定可以节省很多Kit。而且效果不受影响。

mebboy

六月の雪 发表于 2015-5-29 11:54
最早那位哥们提出来用3KD的超滤管，我用的10KD的，这个是截留蛋白的分子量，exosome不算蛋白，反正搞不清具 ...

不是用100KD的吗？

曼珠沙华002

请问大家都是使用哪个公司的浓缩管? 有具体的超离步骤吗？

evomicscience

The different cells will produce the different amount of exosome. The average amount of exosome in cell culture supernatant is around 10^6p/ml. I do not know which kit you use now. If you use PEG-based precipitation kit, you got some, but lose almost half of them. It is good idea to start a large of volume at this point. Labeling exosome and then spike-in will help you figure out the efficiency of isolation.  Checking protein/miRNA and counting particle will help.
Since I do exosome business, I can not suggest that you buy our products.
John

bobo

evomicscience 发表于 2015-6-1 07:03
exosome amount from 40 ml of cell culture supernatants should be seen by naked eyes. The while pelle ...

试剂盒要求用4ml的培养液提取exosome,我怎么做才能确定我提的是exosome呢？如果直接从培养瓶中吸取4ml培养液，那么不敢保证这4ml培养液中有足够的exosome.

evomicscience

bobo 发表于 2015-6-1 08:33
What is  PEG  meaning?

Polyethylene glycol (PEG) is a polymer with the repeated element in parentheses:

H-(O-CH2-CH2)n-OH.

evomicscience

Polyethylene glycol (PEG) is a polymer with the repeated element in parentheses): H-(O-CH2-CH2)n-OH

bobo

六月の雪 发表于 2015-5-31 14:01
millipore超滤管

那您选择40ml的培养液去离心，那么这个离心管您选择的是多少毫升的呢。最后浓缩的液体是留在这个管里面的小管中么？截留蛋白是什么意思呢？