有囊泡相关技术问题请在该贴留言！

hzangs

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hzangs最近几个月比较忙，没时间逐一阅读大家发的帖子。 有什么问题的话可以在这个帖子留言。如果是我之前没有总结过的问题，我看到后会回复。

hzangs

hjj 发表于 2018-7-9 15:08
您好，想请问一下，外泌体载药的话，浓度怎么确定呢？老师能推荐一些外泌体载药的文献吗？？ ...

如果这个浓度能查出来，你的工作量就没多少了。 载药浓度不同的药、不同的来源的外泌体、不同的负载方法都不一样。 这个需要你自己去读十几篇paper  然后好好规划一下，设置不同的梯度 然后寻找一个合适浓度。

chuanchuan

请问有没有什么方法可以让已经提取的外泌体在体外实验中加入培养基且不进入细胞？

15350735509@163

无FBS培养基大家用的哪一家？我看有文章研究刺激外泌体分泌的物理  化学因素，可以用点刺激细胞多分泌一些外泌体吗

15350735509@163

hzangs老师  我刚接触外泌体  1. 打算用SBI公司kit 提取血液肿瘤细胞上清外泌体   您有经验大概需要多少细胞上清吗？2.同样是SBI公司kit  从血浆提取外泌体  初始量大概用多少 ？  后续打算跑western鉴定外泌体    及从外泌体中提取RNA   跑三个miRNA Q-PCR。3.做Q-PCR时  打算trizol提取总RNA   U6做内参，ABI公司的kit     

MMM

hzangs 发表于 2020-2-2 08:18
只要没反复冻融过， 基本不会有什么问题。

请问 人血清-80冻存 提取MVs 是25度解冻还是4度解冻好一些

future1994

hzangs 发表于 2020-12-18 22:04
血浆中的细胞外囊泡分离纯化， 单纯使用一种策略进行分离，基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶 ...

哦哦，谢谢大神，我再查一下

yangduoduo0311

hzangs大神，你好，最近在造动物模型，要用GW4869抑制外泌体 ，找了问多文献，想咨询一下，外泌体抑制的动物浓度是多少，是1.25mg/kg吗？？？我看到好多文献里面写的是这个浓度..求大神翻牌子！！！

hzangs

future1994 发表于 2020-12-17 13:45
不好意思，hzangs前辈，我说错了，是在用超速离心提取血浆来源外泌体，因为我们实验室只有水平转子，所以 ...

血浆中的细胞外囊泡分离纯化， 单纯使用一种策略进行分离，基本都不会很成功。 建议你考虑超速离心+凝胶排阻层析试试。

future1994

hzangs 发表于 2020-12-14 09:46
密度梯度离心，需要回收特定密度区段…   未必是在管底，这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在 ...

不好意思，hzangs前辈，我说错了，是在用超速离心提取血浆来源外泌体，因为我们实验室只有水平转子，所以沉淀是在管底，这几次看到了在管底有些油状或胶冻样沉淀，但是贴壁不牢固，可以随液面有晃动，我就留了一些，后来用PBS重悬后再超速离心就什么都看不到了。离心完我就把所有上清都去掉了，用50~100ulPBS重悬，但是BCA结果也就在0.8ug/ul(每管是2ml血浆)，做了一次电镜也没看到，请问整个操作过程有什么需要改进的地方吗，谢谢大神老师！

hzangs

future1994 发表于 2020-12-13 10:52
您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看 ...

密度梯度离心，需要回收特定密度区段…   未必是在管底，这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在2006年发表的protocol

future1994

您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看到管底有胶冻样沉淀，我官底就留了大约300ul左右，加上PBS重悬后第二遍基本看不见了，这一步上清需要去除干净吗？
我之前两部超离后上清都送的很干净，去做了电镜，什么都没找到，请问应该先做什么NTA还是TEM呢