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【新文速递】exo不同提取方法的比较

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发表于 2015-7-23 10:28:36 | 只看该作者 回帖奖励 |正序浏览 |阅读模式
作者采用了密度梯度离心、超离、超滤、ExoQuick、Exo-spin、qEV等手段分离exo。然后做各种 检测,一些主要结果如下:
密度梯度离心可以得到最纯的exo,但是得率很低。超滤比较好,可以比较好的替代密度梯度离心。

重点是三个kit:ExoQuick的优点在于得到的颗粒大小比较好,大多数在<100nm,而后二者得到了较多>200nm的颗粒。
但ExoQuick有显著的缺点:蛋白污染。
作者通过加样等质量exo蛋白进行跑western的exo marker,发现ExoQuick的条带最弱,Exospin次之,qEV和密度梯度最好。因此作者推测,ExoQuick提取的exo中有其他蛋白的污染。

在讨论中,作者又对结果进行了系统的解释,最后表示:用蛋白定量的方法评估exo是不准哒。。。用Calnexin(一个只在细胞表达的蛋白)评价exo纯度也是不够充分哒。。。

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发表于 2015-11-23 20:12:25 | 只看该作者
非常好的文章,对我们初学者有很好的帮助,非常感谢楼主的分享,先学习了,谢谢
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发表于 2015-11-18 18:37:33 | 只看该作者
楼主,有没有蔗糖梯度及凝胶层析中文版的步骤哇?实验小菜,翻译的好生硬
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发表于 2015-8-20 09:35:00 | 只看该作者
我用过SBI,还不错。
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发表于 2015-8-19 21:43:20 | 只看该作者
Damon 发表于 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取,我怎么感觉我提的浓度很低,测蛋白浓度都测不出来啊 ...

我也用101bio提的,效果也不好。你现在用什么提的呢?
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 楼主| 发表于 2015-8-14 17:48:44 | 只看该作者
虚实高低 发表于 2015-8-14 10:25
如何设对照啊,版主?

如何设对照。。。
A、你取正常培养基,直接加exo-quick,按照protocol提取“exo”,最后重悬,然后干预细胞;
B、你在养A细胞,以B刺激干预A细胞,然后收集A细胞分泌的exo。对照就设无B刺激的A细胞分泌的exo
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发表于 2015-8-14 10:25:53 | 只看该作者
惜名 发表于 2015-7-29 10:49
这个确实需要考虑,SBI法离心的时候有2步,残余液体去除还是比较干净的。另外设立对照组也可以知道是否会 ...

如何设对照啊,版主?
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发表于 2015-8-4 17:28:33 | 只看该作者
请问 有没有试过用免疫沉降和中和沉降的方法来进行外泌体的提取呢?
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发表于 2015-8-1 23:12:48 | 只看该作者
hereissyk 发表于 2015-7-31 15:06
有,将近4k大洋买了,用了三次,分别用了三种方法测试都没有结果,已经在吃灰。 ...

我提的感觉也不咋地,测得浓度很低,几乎就没有,这可咋整啊,钱都花了
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发表于 2015-7-31 15:06:39 | 只看该作者
Damon 发表于 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取,我怎么感觉我提的浓度很低,测蛋白浓度都测不出来啊 ...

有,将近4k大洋买了,用了三次,分别用了三种方法测试都没有结果,已经在吃灰。
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