【新文速递】exo不同提取方法的比较

惜名

作者采用了密度梯度离心、超离、超滤、ExoQuick、Exo-spin、qEV等手段分离exo。然后做各种 检测，一些主要结果如下：
密度梯度离心可以得到最纯的exo，但是得率很低。超滤比较好，可以比较好的替代密度梯度离心。

重点是三个kit：ExoQuick的优点在于得到的颗粒大小比较好，大多数在<100nm，而后二者得到了较多>200nm的颗粒。
但ExoQuick有显著的缺点：蛋白污染。
作者通过加样等质量exo蛋白进行跑western的exo marker，发现ExoQuick的条带最弱，Exospin次之，qEV和密度梯度最好。因此作者推测，ExoQuick提取的exo中有其他蛋白的污染。

在讨论中，作者又对结果进行了系统的解释，最后表示：用蛋白定量的方法评估exo是不准哒。。。用Calnexin（一个只在细胞表达的蛋白）评价exo纯度也是不够充分哒。。。

zhangtao1012450

非常好的文章，对我们初学者有很好的帮助，非常感谢楼主的分享，先学习了，谢谢

花如烟12321

楼主，有没有蔗糖梯度及凝胶层析中文版的步骤哇？实验小菜，翻译的好生硬

shuiyuan0519

我用过SBI,还不错。

xianxian

Damon 发表于 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取，我怎么感觉我提的浓度很低，测蛋白浓度都测不出来啊 ...

我也用101bio提的，效果也不好。你现在用什么提的呢？

惜名

虚实高低 发表于 2015-8-14 10:25
如何设对照啊，版主？

如何设对照。。。
A、你取正常培养基，直接加exo-quick，按照protocol提取“exo”，最后重悬，然后干预细胞；
B、你在养A细胞，以B刺激干预A细胞，然后收集A细胞分泌的exo。对照就设无B刺激的A细胞分泌的exo

虚实高低

惜名 发表于 2015-7-29 10:49
这个确实需要考虑，SBI法离心的时候有2步，残余液体去除还是比较干净的。另外设立对照组也可以知道是否会 ...

如何设对照啊，版主？

coco

请问 有没有试过用免疫沉降和中和沉降的方法来进行外泌体的提取呢?

Damon

hereissyk 发表于 2015-7-31 15:06
有，将近4k大洋买了，用了三次，分别用了三种方法测试都没有结果，已经在吃灰。 ...

我提的感觉也不咋地，测得浓度很低，几乎就没有，这可咋整啊，钱都花了

hereissyk

Damon 发表于 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取，我怎么感觉我提的浓度很低，测蛋白浓度都测不出来啊 ...

有，将近4k大洋买了，用了三次，分别用了三种方法测试都没有结果，已经在吃灰。

Damon

有没有人用过101bio的pureEXO提取，我怎么感觉我提的浓度很低，测蛋白浓度都测不出来啊