超离后Exosome收集的问题

xuxu

之前用试剂盒提Exosome, 总测不到浓度，最近好不容易联系到超速离心机，离完之后能看到沉淀，但是每次吸走上清的时候总会把沉淀不知道吸到哪儿去，结果还是测不到浓度，很郁闷。不知道有没有人碰到我这种情况的，该怎么处理呢？

Seagull

我想问一下怎么浓缩啊，

xuxu

hzangs 发表于 2015-9-6 19:45
其实你可以发现，超速离心之后的exosome是非常松散的一个沉淀，非常容易飘起来，但是如果你不用力去晃或 ...

好的，我试试，谢谢～

hzangs

kasangzc 发表于 2015-9-6 20:28
想问一下你一般都是取多少上清液去超离呢

一般每管35ml  超离之后浓缩成5ml  几个管子总到一起，再超离。

TiTi

我每次超离完（Ti70转子，44000转），管壁的白色沉淀粘附的很牢啊，涡旋震荡才能下来。
管底还有些絮状的东西，都倒掉啦。

kasangzc

hzangs 发表于 2015-9-6 19:45
其实你可以发现，超速离心之后的exosome是非常松散的一个沉淀，非常容易飘起来，但是如果你不用力去晃或 ...

想问一下你一般都是取多少上清液去超离呢

hzangs

xuxu 发表于 2015-9-6 17:38
就是吸走上清的时候沉淀就随着上清的液面晃啊晃的，晃两下就不见了，就散开了。已经很小心了，还是会这样 ...

其实你可以发现，超速离心之后的exosome是非常松散的一个沉淀，非常容易飘起来，但是如果你不用力去晃或者吹，它基本不会重新溶解。  
一般我会在剩下三四毫升的时候用枪开始小心吸去并弃掉上面的培液。最后剩下约200ul，直接重悬exosome。然后加入PBS 冲洗 再超离。 最后使用同样的方法得到200ul 左右 PBS重悬的exosome。

xuxu

Johnny 发表于 2015-9-5 21:59
沉淀很容被吸走 我遇到过。沉淀被吹散是什么情况？弃上清时你怎么会吹沉淀？不应该小心翼翼的不要晃动沉 ...

就是吸走上清的时候沉淀就随着上清的液面晃啊晃的，晃两下就不见了，就散开了。已经很小心了，还是会这样。。。因为我用的是固定角度的转子，沉淀在管壁的一侧，一点都不贴壁，吸上清的时候就随上清一起被吸走了。你离心多少转速、多长时间呢？增加时间会不会使沉淀更贴壁些？

xuxu

Johnny 发表于 2015-9-5 18:45
说明你的沉淀被你吸走了，吸掉上清的时候小心点

对啊，我也知道沉淀被吸走了，用枪头吸上清的时候就能看到沉淀随着上清在晃，而且形态也不固定，很容易被吹散，想请教一下，有没有什么好的方法，能吸走上清而让沉淀不被吹散。