问一下大家都用什么试剂破坏exosome的膜结构啊

微泡biomarker · 发表于 2015-11-10 09:58:39

本人刚接触exosome，在使用了试剂盒得到了exosome后，不知道那种试剂适合破除exosome的膜。顺便问一下大家，破膜之后都用什么方法得到蛋白啊？希望大家多多支持，多多回答哦。

DBLB · 发表于 2019-10-25 10:15:55

习玉峰发表于 2015-11-13 09:35
取决于你从多少细胞培养上清中分离exosomes，最后用多少PBS重悬，两者比例大概是100:1，得到的exosomes蛋 ...

您好，请问您RIPA裂解完了之后，需要煮蛋白离心然后再去测浓度吗。还是裂解完了直接用BCA试剂盒测就行了

DBLB · 发表于 2019-10-25 10:09:19

习玉峰发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

您好，我昨天就是这么处理的！请问您做出来蛋白浓度如何。

shuizhu · 发表于 2019-10-9 14:21:19

你好，我问下细胞上的膜蛋白是不是也会存在于外泌体的膜上呀，谢谢

sonhakuuu · 发表于 2019-1-23 09:54:46

习玉峰发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

请问冰上裂解30min后需要离心吗？离心转速是多少呀？离心时间呢？

meiling · 发表于 2017-5-31 14:11:16

习玉峰发表于 2015-11-13 10:17
对呀，抑制蛋白降解

请问PMSF是不是也是抑制蛋白裂解呢？

murong · 发表于 2016-2-23 15:53:42

学习了，谢谢

习玉峰 · 发表于 2015-11-13 10:17:27

熊胖发表于 2015-11-11 20:00
请问一下你RIPA加cocktail么？

对呀，抑制蛋白降解

习玉峰 · 发表于 2015-11-13 09:35:36

微泡biomarker 发表于 2015-11-11 16:36
非常感谢呢，能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊，还有事用什么沉淀的蛋白呢？ ...

取决于你从多少细胞培养上清中分离exosomes，最后用多少PBS重悬，两者比例大概是100:1，得到的exosomes蛋白接近1ug/ul。（文献上讲的有，还是多看文献吧！）

熊胖 · 发表于 2015-11-11 20:00:59

习玉峰发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

请问一下你RIPA加cocktail么？

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