外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

zjm337 · 发表于 2015-11-27 13:55:32

第一次分离外泌体，用超速离心的方法，最后重悬到PBS中，滴了20微升重悬液到铜网上自然晾干（半小时左右），又滴了20微升磷钨酸到铜网上自然晾干（半小时左右），然后过了一个小时拿去检测拍出来的TEM是这样的黑块。。。不知道问题出在哪，希望大家能给点建议。。。

898702935 · 发表于 2020-9-28 20:23:38

个人感觉SBI试剂盒提的外泌体，电镜结果不是特别好看。
用了一家国产公司的试剂盒，电镜结果还算可以。

sante · 发表于 2020-9-28 17:15:26

各位大神，我的电镜图打出来以后背景有很多条状杂质，不知道是什么东西，请问一下背景脏应该如何改进呢？我用的是超离的方法提取外泌体，超离前会用0.22um滤膜过滤一遍，100ml上清最后用100ulPBS重悬，没有稀释直接送样打电镜。不知道杂质是不是PBS里的盐或者什么?

gjw423 · 发表于 2019-3-15 11:58:21

hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液 ...

请问你们用的示细胞上清吗，你们多少量的细胞上清用30ul的pbs重悬呀

zjm337 · 发表于 2016-4-5 21:30:06

hzangs 发表于 2016-4-1 10:45
我的细胞系 60-100ml 可以拿到约 20-40ug 不同的细胞系产量有差别。

好的，谢谢！

hzangs · 发表于 2016-4-1 10:45:34

zjm337 发表于 2016-4-1 08:27
您好，问问您150~200ml上清大概能离心出多少微克蛋白的exosome？

我的细胞系 60-100ml 可以拿到约 20-40ug 不同的细胞系产量有差别。

zjm337 · 发表于 2016-4-1 08:27:38

hzangs 发表于 2016-2-23 17:56
做exosomes的鉴定和定性的时候还是要有一个粒子数和粒子直径分布的数据的。
后面做实验出表型做机制 ...

您好，问问您150~200ml上清大概能离心出多少微克蛋白的exosome？

hzangs · 发表于 2016-2-23 17:56:51

zjm337 发表于 2016-2-23 08:48
好的，谢谢！我们这边没有nanosight仪器，表征的时候我不测exosome的粒子数可以吗？ ...

做exosomes的鉴定和定性的时候还是要有一个粒子数和粒子直径分布的数据的。
后面做实验出表型做机制的时候没有必要每次都测粒子数

zjm337 · 发表于 2016-2-23 08:48:59

hzangs 发表于 2016-2-22 10:00
目前paper里面只有两种常见的反映exosomes量的方法，一种是用蛋白质的量反应exosomes的数量，一种是用仪 ...

好的，谢谢！我们这边没有nanosight仪器，表征的时候我不测exosome的粒子数可以吗？

咏咩咩 · 发表于 2016-2-22 14:11:15

zjm337 发表于 2016-2-21 21:09
请问一下你们的nanosight是用什么仪器？我们这边好像都没有这个仪器。。

马尔文的机器..NAT..名字就是nanosight..

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