本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度

jianwen · 发表于 2016-3-10 00:39:58

400ml血浆分离出的外泌体，

1、往外泌体沉淀中加入1ml Trizol，混匀（反复吹打或涡旋），4℃放置10min。
2、按比例（1ml Trizol：200ul氯仿）加入氯仿200ul，剧烈振荡，4℃放置15min。
4、4℃ 12000×g离心15min。
5、吸取上层水相至新EP管（350ml）。
6、按比例（1ml Trizol：500ul异丙醇）加入异丙醇500ul，混匀，4℃放置10min。
7、4℃ 12000×g 离心10min，弃上清，RNA 沉于管底。
8、按比例（1ml Trizol：1ml 75%乙醇）加入75%乙醇1ml，温和振荡。
9、4℃ 12000g 离心 5min，尽量弃上清（重复75%乙醇洗涤一次）。
10、室温晾干。
11、加用5ulRNA溶解液溶解沉淀RNA。

所测RNA浓度：50多ug/ml

peggy4598690 · 发表于 2019-2-11 14:19:55

jianwen 发表于 2016-5-19 16:47
用的血浆，最近在做血清的

请问楼主最近血清的结果也做出来了吗?量也还是这么少吗?

peggy4598690 · 发表于 2019-2-11 13:38:58

想请问楼主您的步骤是参考哪一份文献？谢谢

xihuniao123 · 发表于 2018-12-11 15:31:54

血浆不太好做，如果要想浓缩一下浓度，可以用BIOG血浆富集RNA提取方法，可以提高浓度，一般血浆1ml以上结果好一些。

luchuan100 · 发表于 2017-9-18 10:18:03

konggy · 发表于 2016-11-14 15:44:41

有试过用测序来做后续的工作吗。

芋仔61 · 发表于 2016-10-27 12:49:58

楼主你好，我们也是用life外泌体提取试剂盒，所得外泌体沉淀特别大，难以重悬，导致TRIZOL裂解不完全。请问楼主遇到这种问题吗，如何解决？
看楼主提出来的浓度确实很高呢，是用什么方法测定的浓度？onedrop吗？有没有做A2100检测呢？

一口润心田 · 发表于 2016-8-4 11:10:27

用的是trizol，不是trizol ls吗？另外楼上说的exosome RNA试剂盒楼主后来有尝试吗

jianwen · 发表于 2016-6-21 08:46:12

wxy 发表于 2016-6-6 20:38
楼主，前一段时间我手工提exosomes中的总RNA浓度跟你一样，不知道你现在有解决的办法了么 ...

最近我又试了次，用TRIZOL提取浓度还是一样，但发现直接提取血浆的RNA浓度是外泌体的十多倍。公司是用专门提miRNA的试剂盒提的，浓度确实高些

wxy · 发表于 2016-6-6 20:38:43

楼主，前一段时间我手工提exosomes中的总RNA浓度跟你一样，不知道你现在有解决的办法了么

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本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度

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