刚跑了一次WB 为什么没结果

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-2 17:57:01

本人是用英杰公司的试剂盒提取的外泌体，跑WB用的是abcam的小鼠cd63，当时加目标一抗稀释比例1比500，为什么跑出来β-actin有条带，而目标抗体没有，不知道哪个环节出了问题

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-12 09:16:36

hzangs 发表于 2016-4-5 12:03
如果你是用的是invitrogen那款沉淀试剂盒，没有看到沉淀的话你可能没有拿到任何东西。
沉淀试剂盒往往 ...

好的多谢啦

fight2015 · 发表于 2016-4-5 12:15:27

hzangs 发表于 2016-4-5 12:01
这个要看你的抗体说明书里的建议稀释倍数。
一般我们实验室习惯上跑WB，大公司的抗体稀释1:2000-5000 ...

哦，好的，谢谢

hzangs · 发表于 2016-4-5 12:03:20

神外勇哥哥发表于 2016-4-5 11:50
好的多谢啦在问一下一般试剂盒离心出来的外泌体能看的到沉淀嘛，如果看不到是不是量不够 ...

如果你是用的是invitrogen那款沉淀试剂盒，没有看到沉淀的话你可能没有拿到任何东西。
沉淀试剂盒往往都会拿到明显的沉淀，那些沉淀里有一定含量的exosome

hzangs · 发表于 2016-4-5 12:01:44

fight2015 发表于 2016-4-5 12:00
请问ab抗CD63一般稀释到多少。

这个要看你的抗体说明书里的建议稀释倍数。
一般我们实验室习惯上跑WB，大公司的抗体稀释1:2000-5000 小公司的抗体 1:1000

fight2015 · 发表于 2016-4-5 12:00:06

hzangs 发表于 2016-4-5 09:36
你的抗体稀释比例没问题。但是一般WB的抗体会按照1:1000--1:10000的比例稀释。没有必要1:500
abcam ...

请问ab抗CD63一般稀释到多少。

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-5 11:50:20

hzangs 发表于 2016-4-5 09:36
你的抗体稀释比例没问题。但是一般WB的抗体会按照1:1000--1:10000的比例稀释。没有必要1:500
abcam ...

好的多谢啦在问一下一般试剂盒离心出来的外泌体能看的到沉淀嘛，如果看不到是不是量不够

hzangs · 发表于 2016-4-5 09:36:53

神外勇哥哥发表于 2016-4-5 09:28
蛋白具体含量没测，用BCA法显示有蛋白，主要就是求教我抗体稀释比例对嘛，有没有标准的参考 ...

你的抗体稀释比例没问题。但是一般WB的抗体会按照1:1000--1:10000的比例稀释。没有必要1:500
abcam CD63 的抗体我的一个师妹用过，效果还可以的。

神外勇哥哥 · 发表于 2016-4-5 09:28:46

hzangs 发表于 2016-4-4 21:15
你上样蛋白多少ug？

蛋白具体含量没测，用BCA法显示有蛋白，主要就是求教我抗体稀释比例对嘛，有没有标准的参考

hzangs · 发表于 2016-4-4 21:15:01

神外勇哥哥发表于 2016-4-4 20:54
我提的是炎症刺激星形胶质细胞的上清液，当时取了3瓶上清液，12ML总共，用的试剂盒提的，抗体是ABCAM的CD ...

你上样蛋白多少ug？

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