大家都是用什么方法得到的exo中的RNA?

Aoterdong

前段时间用Invetrogen的trizol 提RNA，全程无肉眼看见白色沉淀，最后浓度接近于纯水，有没有人可以来指点一下到底该如何成功提取exo的RNA?

niceman1987

wenzhouzsl 发表于 2015-5-1 20:38
您好，trizol提取外泌体RNA，浓度怎么样？
我没有做过，今天提了一次，最后加了10ul水，浓度只有21ng/ul ...

你好，我这里有篇文献，关于外泌体中RNA提取的，你看看吧，希望对你有帮助。http://www.jove.com/video/3037/isolation-and-characterization-of-rna-containing-exosomes

wenzhouzsl

Johnny 发表于 2015-1-3 23:19
本人试过，trizol 法可以用来提外泌体的RNA的

您好，trizol提取外泌体RNA，浓度怎么样？
我没有做过，今天提了一次，最后加了10ul水，浓度只有21ng/ul。260/280在1.5几，也不知道能不能反转，往下做？
下一步要测miRNA，有8个miRNA要茎环反转，不清楚这些个miRNA是否被包裹在exosome中，没有相关文献。反转时10ul体系加1ul 总RNA行吗？

wenzhouzsl

谢谢您的帮助

木瓜31

我用trizol-ls提过，纯度也低（1.5），浓度30~40ng/ul（30ul)，PCR U6的CT值27~28。即使看不到沉淀，也可试试

ZYL2004

我来说说我的实验经验。
最开始，担心exosomes中的RNA含量较低，所以买了invitrogen的exosomes的RNA提取试剂盒，回来试了几次，几乎得不到RNA，后来索性用trizol提取，发现效果不错，需要注意的是trizol提取时尽量多exosomes，这样到最后RNA沉淀的时候你甚至可以隐约看到白色沉淀（这么干主要是保证实验更有把握）。依据我的经验100ml PC12细胞培养液超离获得的exosomes大约能够提取2至5微克的RNA。

yy8651

ZYL2004 发表于 2015-7-20 23:11
我来说说我的实验经验。
最开始，担心exosomes中的RNA含量较低，所以买了invitrogen的exosomes的RNA提取试 ...

你是超速离心提的？Trizol？能否说下具体的方法

wintersweet_d

学习了

xiaodoudou

ZYL2004 发表于 2015-7-20 23:11
我来说说我的实验经验。
最开始，担心exosomes中的RNA含量较低，所以买了invitrogen的exosomes的RNA提取试 ...

想问一下你在PCR时用的是什么内参？

烟尽云淡

wenzhouzsl 发表于 2015-5-1 20:38
您好，trizol提取外泌体RNA，浓度怎么样？
我没有做过，今天提了一次，最后加了10ul水，浓度只有21ng/ul ...

您好，我也是用trizol法提取上清exosomal rna，最后得到的rna一直不理想，量很少，100+上清最后rna都不到1ug。想问下您的实验结束了么？您当时用trizol法提取exosomal rna的步骤是和提细胞内rna一样的步骤么？有什么要特别注意的地方吗？