菜鸟求助 细胞培养上清SBI 试剂外泌体分离

muzi.csu

用SBI公司的Exoquick-TC分离肿瘤细胞培养上清中的外泌体。刚开始用无血清培基培养肿瘤细胞，48小时后收集上清（5ml），加入试剂过夜后离心未发现沉淀。后来用10%的普通胎牛血清培养细胞，离心后沉淀较多。但是因为胎牛血清中含有胎牛的外泌体，所以后来又换成了SBI公司的EXO-free的血清10%培养细胞，48小时候收集上清，离心却又未见沉淀。而文献报道该肿瘤细胞可分泌大量外泌体，但是不知道为什么我分离不出来...  麻烦各位大神指教啊，不胜感激

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我这边是用超速离心机离心血清后，去除外泌体，然后先是配成2%的去Exos的FBS培养基培养48h后，收集上清（约5ml的量）用SBI的试剂盒提exos，发现沉淀很少；后来又用20%去exos的FBS培养基培养24h后，收集上清（约2.5ml的量）用SBI的试剂盒提取exos，发现沉淀比之前的多。怀疑是不是超速离心机离心去除exos去除的不干净，有残留的。不知道用无血清的培养基培养细胞，然后收集上清提exos可不可以提出来？求高手指点。

grapetian

我两个细胞系，各10ml培养上清，加2ml试剂,一个有明显的沉淀，一个没有看到沉淀

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Johnny 发表于 2015-1-24 19:11
你好，5ml的上清量太少。建议加大上清量。
另外，请问SBI公司的EXO-free的血清是从哪儿买的？ ...

请问
之前用SBI的kit最后一步1500g离心5min得到的沉淀基本上看不见，最近用3000g离心5分钟得到了肉眼可见的沉淀，还是不是外泌体？转速和时间是不是要严格按照protocol操作？

cherry

加大到50ml 看看呢？一般看文献是间隔24小时收上清呢

ashey

梦想照进现实 发表于 2015-7-13 09:08
你好，最近准备用life的kit提取细胞培养上清，请问建议用多少上清呀？

同问，细胞培养上清需要超滤浓缩吗？用了10ml培养上清也没有肉眼可见的沉淀啊。。。

七七溪

freeman811 发表于 2015-6-24 23:22
超滤管是30KD，只要没有滤膜破损，超滤管具有残液保留功能，保证最终滤液的量在200ul左右，不会都滤掉。
...

请问1:1这个kit用的是SBI的吗？

子非鱼

weaver 发表于 2015-10-30 19:33
我想问问大家买的什么公司的SBI 试剂盒？哪家的比较好 能不能拍张说明书的图片呢？ ...

我买的是吉泰生物科技有限公司的，你现在做的怎么样了，SBI试剂盒到底怎么样啊，真是森森的忐忑...

weaver

iiibuick 发表于 2015-9-9 08:52
我想请问一下，我也买的SBI的试剂盒，还没开始用，看了说明书有一些不是很清楚的地方，在最后加buffer那步 ...

我想问问大家买的什么公司的SBI 试剂盒？哪家的比较好 能不能拍张说明书的图片呢？

iiibuick

我想请问一下，我也买的SBI的试剂盒，还没开始用，看了说明书有一些不是很清楚的地方，在最后加buffer那步是跟具体的后续操作有关系的，但说明书里主要就是针对RNA extraction 和protein extraction，我如果只是想要提取exosome，后面再标记蛋白，那是不是直接加PBS buffer就可以了？

梦想照进现实

宝莲 发表于 2015-4-23 19:18
我用life的试剂盒，20ml无血清的细胞培养上清提取也没有沉淀，做电镜可以看到少量外泌体。 ...

你好，最近准备用life的kit提取细胞培养上清，请问建议用多少上清呀？