怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量？

sldingxiang · 发表于 2016-7-2 16:27:27

现有普通细胞和病毒感染后的细胞，想比较这两种细胞分泌的外泌体的量。现在的做法是：用相同的细胞数铺板，两天后取上清，提外泌体，用相同体积的裂解液裂解，作WB时上样上相同的体积，结果显示两种细胞外泌体含量不同。但是现在存在的问题是两种细胞增殖速度不同，培养两天取上清后计数，两者的细胞个数大概是3:4，这样的话，细胞个数不同分泌的外泌体数量肯定不同。请问这个思路对吗还是说做WB之前必须要BCA定量上样上相同量的蛋白？

Docter.Wang · 发表于 2018-12-9 11:30:02

尿液中外泌体看到过用肌酐校准的（PMID:25729563 ）；细胞中能否做细胞计数，用细胞数校准，我觉得可以尝试。

wqw131343 · 发表于 2017-6-27 14:09:31

hlqp 发表于 2016-7-7 23:45
好的，谢谢，我的DLS结果总是在200多nm左右，不知道为什么？

你好，请问你测的DLS时，有用什么校准吗，使用哪种模式啊，谢谢

sldingxiang · 发表于 2016-7-8 11:38:46

hlqp 发表于 2016-7-7 23:45
好的，谢谢，我的DLS结果总是在200多nm左右，不知道为什么？

我也是新手没做过DLS……你可以去找大神们问问

hlqp · 发表于 2016-7-7 23:45:13

好的，谢谢，我的DLS结果总是在200多nm左右，不知道为什么？

sldingxiang · 发表于 2016-7-7 16:16:55

hlqp 发表于 2016-7-6 13:03
那提取外泌体全部过程是不是最好在无菌条件下呢？重悬外泌体的PBS要过滤过吗？谢谢 ...

我没有完全无菌，PBS过滤了

hlqp · 发表于 2016-7-6 13:03:24

那提取外泌体全部过程是不是最好在无菌条件下呢？重悬外泌体的PBS要过滤过吗？谢谢

sldingxiang · 发表于 2016-7-6 10:25:55

hlqp 发表于 2016-7-5 22:38
请问外泌体要怎么测质量

没有测质量直接做的WB定量

hlqp · 发表于 2016-7-5 22:38:56

请问外泌体要怎么测质量

sldingxiang · 发表于 2016-7-5 16:59:27

Johnny 发表于 2016-7-5 16:42
同hereissyk兄，量没有什么精确的方法，实验操作、仪器本身等各方面误差很大，除非你的细胞分泌的外泌体 ...

嗯谢谢建议。感觉走到了死胡同，是要改变思路了~

sldingxiang · 发表于 2016-7-5 15:05:43

hereissyk 发表于 2016-7-5 10:47
建议跳过比量，直接比效果，量没有什么精确的方法，意义也不是很大。

谢谢你的建议。我原本的思路是研究某种基因能否影响外泌体的分泌。。。有看过类似的报道吗？

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怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量？

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