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关于去exosomes血清制备的一些疑问总结

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发表于 2015-5-8 20:59:20 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
各位坛友,最近在自己做去exosomes的血清,有些疑问与大家分享,请有经验的朋友帮忙解答下,不胜感激!

1、去exosomes血清超离的最低有效时间和离心力是多少?
      有的说11万g*70min,有的说1小时,还有的说2小时,到底最低离心力和时间多少可以达到要求?

2、去exosomes血清制作时,离心后的液体,离心管内从上到下颜色逐渐加深,沉淀物不多,吸取时候到什么位置停止?
     也就是说,基本上到哪个位置开始出现exosomes?
     如图

3、去exosomes血清制备结束后,如何验证血清中是否还有exosomes?
      因为血清极易污染,不再进行超速离心能否验证?有没有其他方法验证

4、如何验证人类肿瘤细胞培养液中的exosomes是人源的,而不是来自血清中的?
     (因为培养前没有验证去exosomes血清中是否含有exosomes)

5、超速离心管超离结束后取出十分困难,容易污染血清,大家是怎么保证不会污染的?


6、超离后的血清对细胞的生长状态有没有影响?

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沙发
发表于 2015-5-9 08:53:06 | 只看该作者
MARK。
各位做过的可以来讨论讨论,没钱的孩子真可怜。。。
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发表于 2015-6-3 13:45:50 | 只看该作者
赞!!请教楼主知不知道microvesicle提取方法??和exosome有什么区别??
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 楼主| 发表于 2015-6-3 16:08:55 | 只看该作者
wfmq 发表于 2015-6-3 13:45
赞!!请教楼主知不知道microvesicle提取方法??和exosome有什么区别??

额,这个真不知道
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发表于 2015-10-9 18:17:38 | 只看该作者
问题问的好,新手我也坐等答案。
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发表于 2015-11-27 09:58:47 | 只看该作者
楼主得出答案了吗?求分享啊。
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发表于 2015-12-1 11:21:57 | 只看该作者
请问你这些问题都解决了吗?刚刚开始提取exosome也很纠结。。。期待你能分享一下你的经验,谢谢!
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发表于 2015-12-2 20:22:48 | 只看该作者
我们是采用超离,100000g×5h/次×2次,然后0.22um滤器过滤,两次超离后得到的血清中看不到沉淀了,就认为是Exo-free了,但是也没有进一步的实验证明。
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发表于 2015-12-2 21:03:15 | 只看该作者
质谱实验,一般细胞是用同位素SILAC标记的,鉴定有同位素标签则认为是细胞来源的,这个肯定准,但是成本比较大
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发表于 2015-12-3 20:15:08 | 只看该作者
惜名 发表于 2015-5-9 08:53
MARK。
各位做过的可以来讨论讨论,没钱的孩子真可怜。。。

你好,我想借楼问一下,是细胞的培养全过程都要用去exosomes的血清吗?
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