elisa定量蛋白检测血清exosome的含量多少？

大琳宝儿 · 发表于 2015-7-22 10:33:15

本帖最后由大琳宝儿于 2015-7-22 16:00 编辑

我可不可以利用elisa方法检测血清中的exosome的标志蛋白来试图定量血清中exosome的含量？或者提取血清总蛋白，跑western看标志蛋白的多少来定量血清里exosome多少麻烦大家给点意见嘿嘿

大琳宝儿 · 发表于 2015-7-24 10:06:52

惜名发表于 2015-7-23 17:30
我觉得可以试试啊，楼主在文献里看到过这种方法么？

没看到过，一般文献不用western定量啊但我想定量看看

hereissyk · 发表于 2015-7-23 00:07:02

我觉得难点反而在于如何确保把血清中的exo都提出来，先保证完整的提，下一步才是测定含量，含量用蛋白定量就要考虑到纯度的问题，单用某个标志蛋白又会有亚群的问题。。。真烦

大琳宝儿 · 发表于 2015-7-23 07:51:29

hereissyk 发表于 2015-7-23 00:07
我觉得难点反而在于如何确保把血清中的exo都提出来，先保证完整的提，下一步才是测定含量，含量用蛋白定量 ...

不先提取出exo 直接在血清里检测应该就不会出现这样的问题但其实我有两点不是很很清楚 1：exo的标志蛋白占总血清蛋白的比例会不会太太少而不好检测（起码western不容易）2：像CD63 81 9等等这些标志蛋白真的只在exo上面有吗？我也觉得挺烦的嘿嘿

hereissyk · 发表于 2015-7-23 16:07:54

直接检测如何排除其他囊泡？标志蛋白如CD63比例不会小，但是没有特异性，各种细胞的exo都会有CD63表达。

惜名 · 发表于 2015-7-23 17:30:04

我觉得可以试试啊，楼主在文献里看到过这种方法么？

yy8651 · 发表于 2015-7-24 09:47:30

感觉还是要提出来测吧

大琳宝儿 · 发表于 2015-7-24 10:09:47

hereissyk 发表于 2015-7-23 16:07
直接检测如何排除其他囊泡？标志蛋白如CD63比例不会小，但是没有特异性，各种细胞的exo都会有CD63表达。 ...

只要是囊泡结构上都有CD63吗？还是只exosome上有？这方面感觉了解的少啊再查查得我~

大琳宝儿 · 发表于 2015-7-24 10:12:13

yy8651 发表于 2015-7-24 09:47
感觉还是要提出来测吧

如果踢出来检测的话会有些怀疑 exosome提的彻不彻底有没有损失如果western的话定量需要内参啊没有合适内参也是问题嘿嘿

大琳宝儿 · 发表于 2015-7-24 10:15:08

hereissyk 发表于 2015-7-23 00:07
我觉得难点反而在于如何确保把血清中的exo都提出来，先保证完整的提，下一步才是测定含量，含量用蛋白定量 ...

同意，所以感觉如果有elisa检测会好点？

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