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得到的外泌体储存在-80℃后,怎么溶解

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楼主
发表于 2015-11-9 14:33:40 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
请教各位大神,得到的外泌体储存在-80℃后,怎么溶解,求指教,谢谢!
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沙发
发表于 2015-11-9 18:43:24 | 只看该作者
我们都是直接冰上溶解,之前听说有人也会先放-20,我觉得多少都会有些影响,最好现提现用吧
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发表于 2015-11-9 19:34:45 | 只看该作者
丁倩倩 发表于 2015-11-9 18:43
我们都是直接冰上溶解,之前听说有人也会先放-20,我觉得多少都会有些影响,最好现提现用吧 ...

嗯  支持~~
我的分离的exosomes,凡是被零度以下冷冻过的,都只用来杂western,不再用于其他实验
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 楼主| 发表于 2015-11-10 15:40:18 | 只看该作者
hzangs 发表于 2015-11-9 19:34
嗯  支持~~
我的分离的exosomes,凡是被零度以下冷冻过的,都只用来杂western,不再用于其他实验 ...

你好,我用乳腺癌细胞MM231上清提取的外泌体,梯度离心,得到的量特别的少,请问有什么方法能使得到的外泌体的量多一些呢?还有你们收集细胞上清是收集到一定量才离心一次,还是收集一次离心一次呢?
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发表于 2015-11-10 17:09:00 | 只看该作者
Seagull 发表于 2015-11-10 15:40
你好,我用乳腺癌细胞MM231上清提取的外泌体,梯度离心,得到的量特别的少,请问有什么方法能使得到的外 ...

exosomes的分出来的量确实很少。  一般我们会一次培养很多细胞,然后一次一收,不会存放到一定量。
基本上 都是15cm dish 3-5盘吧
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发表于 2015-11-10 21:00:11 | 只看该作者
参考“小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法”文献     
外泌体提取 收集上述培养上清液后离心,
4 ℃,300 × g,低温离心 15 min,去除细胞及大细胞碎
片; 4 ℃,1 200 × g, 低温离心 20 min, 去除小细胞碎
片; 4 ℃, 10 000 × g, 低温离心30 min,取上清液, 小
心移至含 Tris /蔗糖/D20( 30 g 无酶蔗糖,2. 4 g Tris
碱溶于 50 mL D20 中, 调至 pH 7. 4, 过滤除菌备用)
超速离心管中,4 ℃ ,100 000 × g, 离心 2 h,收集缓冲
垫; 预冷 PBS 混悬稀释后,4 ℃ ,100 000 × g离心2 h,
收集 黄 白 色 沉 淀 外 泌 体; PBS 重 悬 外 泌 体 后,
0. 22 μm滤膜过滤除菌, - 80 ℃ 保存备用; 待用时,
BCA 法定量外泌体的总蛋白。
大约 2 × 107 个 MS-1 细胞可提取( 200 ± 40) μg 外
泌体( 按 BCA 蛋白定量法计量)
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发表于 2024-8-30 10:47:47 | 只看该作者
在-80℃怎么保存,保护剂·
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