外泌体电镜拍出来是这样的，希望大家给点建议

zjm337

第一次分离外泌体，用超速离心的方法，最后重悬到PBS中，滴了20微升重悬液到铜网上自然晾干（半小时左右），又滴了20微升磷钨酸到铜网上自然晾干（半小时左右），然后过了一个小时拿去检测拍出来的TEM是这样的黑块。。。不知道问题出在哪，希望大家能给点建议。。。

hzangs

我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。 然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液体，然后醋酸双氧铀负染1min，滤纸洗掉多余液体。然后开始准备上电镜（上机前样品应该是晾干的，准备期间就足以晾干，大概在10min左右即可） 80-120kv成像即可。

zqy2002

楼主上图中未见到明确的exosome；倒数第二张图中是背景色，不是exosome。描述的染色方法错误。磷钨酸负染请参照我的其他回答帖子。

zjm337

hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。 然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液 ...

好的。。谢谢！

zjm337

zqy2002 发表于 2015-11-27 20:37
楼主上图中未见到明确的exosome；倒数第二张图中是背景色，不是exosome。描述的染色方法错误。磷钨酸负染请 ...

请问一下第一张和第二张里面的是不是也是背景色？没有产物？我是用了200ml上清超速离心，到最后有白色沉淀产生，用1mlPBS重悬，最后制样拍TEM，很奇怪为什么会没有东西呢？

zqy2002

也许第一二张片子里面白色底色是exosome也不一定。但目前不能看出来。

怒放的生命

hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬，大概30ul。 然后10ul上样到铜网，沉淀1min，滤纸吸掉多余液 ...

请问你是用多少的培养上清沉淀下来的exosome呢？用30ul重悬。  大概蛋白能达到多少ug？

hzangs

怒放的生命 发表于 2015-11-30 11:05
请问你是用多少的培养上清沉淀下来的exosome呢？用30ul重悬。  大概蛋白能达到多少ug？ ...

100-150ml

怒放的生命

hzangs 发表于 2015-11-30 11:47
100-150ml

多谢！在论坛里收获好大

zjm337

zqy2002 发表于 2015-11-29 19:29
也许第一二张片子里面白色底色是exosome也不一定。但目前不能看出来。

这是我今天新拍的TEM，感觉有点怪。。特别是第一第二张，请问这个是exosome吗？