求助！PEG聚沉--磷钨酸负染--exo电镜鉴定

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-19 11:46:11

各位老师及大神们！麻烦大家帮忙看看图中红笔画出的是外泌体吗？是用PEG6000聚沉后，2%磷钨酸负染后打电镜的。谢谢大家！

生物小博 · 发表于 2016-7-19 11:58:38

个人认为应该是我也打过一次电镜但是样品杂质太多看到的外泌体太少请问你这杂质主要是啥会影响你后续试验吗需要除去吗

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-19 12:00:32

我觉得可能是PEG吧！后续我们想提RNA，估计影响不大吧

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-20 19:30:59

各位大神！麻烦大家再帮我看看。上面这个是外泌体吗？发文章能用这种图吗?觉得背景好复杂

hzangs · 发表于 2016-7-21 12:06:51

看着有点杂。你可以稀释一点再打看看。

子非鱼 · 发表于 2016-7-21 15:22:09

楼主，你这是提取的细胞培液exo，还是血清的呀？PEG聚沉后直接打电镜吗？还是也经过超离了？

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-25 19:40:36

非常感谢大家的回复！
@子非鱼是提取的血清的。没经过超离，PEG聚沉后，PBS稀释后打的

子非鱼 · 发表于 2016-7-26 16:08:08

本帖最后由子非鱼于 2016-7-26 16:12 编辑

zqlhiiaxyz 发表于 2016-7-25 19:40
非常感谢大家的回复！
@子非鱼是提取的血清的。没经过超离，PEG聚沉后，PBS稀释后打的 ...

谢谢楼主回复！我还想继续问：楼主是8%的PEG6000聚沉吗？多少血清提取的exo，PEG聚沉了几次？多少PBS溶解上的电镜？我也做血清，做了两次电镜都不好，想从楼主这取点经！

zqlhiiaxyz · 发表于 2016-7-28 13:24:48

是血清先过0.45um滤器，剩下350ul，经8%、5%PEG两次沉淀（没有超离机），40ulPBS溶的，取了其中10ul，稀释了5-10倍打的。我这个也很不好，背景太复杂了!

小孔加油 · 发表于 2016-7-28 15:15:44

楼主，请问您是PEG6000怎么提取外泌体，有没有protocol提供？现在刚买回PEG6000粉末，不知道怎么配制

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