外泌体WB上样量

阿措 · 发表于 2016-7-24 16:40:38

想请问一下各位同学，外泌体跑WB上样量是根据提取量来确定，用细胞蛋白作为对照，那么细胞上样量是要与外泌体的量一样么？需要测外泌体的浓度么？用BCA法？

hzangs · 发表于 2016-7-24 17:20:09

嗯，最好是细胞裂解液和外泌体上样上一样的蛋白量。浓度可以用BCA 或者broadford法测定

tylz1985 · 发表于 2016-7-28 21:47:50

我提的外泌体都测不出来浓度

阿措 · 发表于 2016-8-11 20:51:55

tylz1985 发表于 2016-7-28 21:47
我提的外泌体都测不出来浓度

我第一次提的外泌体测过，除了肿瘤的一个样本浓度有2.2（因为我只加了50ULPBS)，其余的可能是PBS多了稀释了，浓度特别低，呃呃只有0.几，尤其原代细胞真的浓度太低太低，根本跑不出来，可能原代细胞本身分泌就少吧。我今天提了一批原代细胞，没有测浓度，直接加裂解液然后buffer变性，明天定性看看有没有

阿措 · 发表于 2016-8-11 20:53:18

hzangs 发表于 2016-7-24 17:20
嗯，最好是细胞裂解液和外泌体上样上一样的蛋白量。浓度可以用BCA 或者broadford法测定 ...

测出浓度太低，根本没法同步啊，没有那么多量这是关键

hzangs · 发表于 2016-8-11 22:24:45

阿措发表于 2016-8-11 20:53
测出浓度太低，根本没法同步啊，没有那么多量这是关键

你可以考虑直接买天根的BCA或者broadford的蛋白定量kit 用灵敏一点的可以的。国产的BCA定量kit 也不贵

dandan1724 · 发表于 2016-8-22 15:19:16

阿措发表于 2016-8-11 20:51
我第一次提的外泌体测过，除了肿瘤的一个样本浓度有2.2（因为我只加了50ULPBS)，其余的可能是PBS多了稀释 ...

你好，我想知道你后来原代细胞提取出来的怎样？

阿措 · 发表于 2016-9-4 11:32:55

dandan1724 发表于 2016-8-22 15:19
你好，我想知道你后来原代细胞提取出来的怎样？

放暑假了G20，所以没有养细胞了，等回去在试试，不过提了几次，基本量都很少

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外泌体WB上样量

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