外泌体蛋白浓度问题

我是小白 · 发表于 2016-12-8 21:32:31

用超速离心法提取血清中外泌体后，pbs重悬。在测蛋白和蛋白变性的过程中需要加入裂解液吗？目前我自己一直未加裂解液，向加过裂解液的同志学习一下经验.

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-12-9 09:52:59

如果准备做western，弃去上清后，我直接用加入RIPA裂解液，冰上裂解10分钟后，BCA法测浓度。

我是小白 · 发表于 2016-12-9 11:04:23

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-9 09:52
如果准备做western，弃去上清后，我直接用加入RIPA裂解液，冰上裂解10分钟后，BCA法测浓度。 ...

可是还涉及到外泌体保存问题。

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-12-9 22:46:28

I got. 如果后续实验需要完整外泌体，我们实验室用NTA测浓度，还有人PBS重悬后取一点直接BCA法测蛋白浓度。

鱼儿 · 发表于 2016-12-15 22:23:35

谢谢楼主

鱼儿 · 发表于 2016-12-15 22:29:26

学习一下，楼主，谢谢

xiaoruan · 发表于 2018-1-9 12:10:20

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-9 09:52
如果准备做western，弃去上清后，我直接用加入RIPA裂解液，冰上裂解10分钟后，BCA法测浓度。 ...

亲，你的浓度测来是多少呀，用的什么样本，量是多少呀

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-9 23:08:37

xiaoruan 发表于 2018-1-9 12:10
亲，你的浓度测来是多少呀，用的什么样本，量是多少呀

大鼠原代胶质细胞来源的外泌体，100ml无血清培养基，24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬，BCA定蛋白量，浓度一般0.4-0.5微克/微升。Western，load10微克蛋白。

ronaldchen · 发表于 2018-1-12 14:45:27

baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-9 23:08
大鼠原代胶质细胞来源的外泌体，100ml无血清培养基，24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬，BCA定蛋白 ...

请问你做的marker是？ CD63好做么？

baishixiaoyaozi · 发表于 2018-1-13 00:03:50

ronaldchen 发表于 2018-1-12 14:45
请问你做的marker是？ CD63好做么？

CD63, flotilin, tsg101
CD63用的是Santa Cruz的抗体，还可以。Smear大小在50-70Kda之间

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