超速离心后，PBS洗多少次比较合适？

北燕南飞 · 发表于 2017-4-18 16:19:13

采用经典protocol方法（PBS清洗一次）对细胞培养液中外泌体进行提取时，电镜做出来背景非常脏
大家一般清洗几次，多次清洗会不会导致外泌体破裂？

hzangs · 发表于 2017-4-18 16:59:04

这个可能和细胞系本身有关，也跟你使用的染料有关。脏东西可能是染料里的。我是洗一次到两次一般一次

北燕南飞 · 发表于 2017-4-18 17:01:36

本帖最后由北燕南飞于 2017-4-20 14:56 编辑

hzangs 发表于 2017-4-18 16:59
这个可能和细胞系本身有关，也跟你使用的染料有关。脏东西可能是染料里的。我是洗一次到两次一般一次 ...

有道理

八戒在五湖 · 发表于 2017-4-23 10:01:27

楼主，我想问一下你提外泌体的protocol···

北燕南飞 · 发表于 2017-4-24 14:54:54

八戒在五湖发表于 2017-4-23 10:01
楼主，我想问一下你提外泌体的protocol···

300g 10min，取上清；2,000g 10min，取上清； 10,000g 30min，取上清； 100,000g 70 min，取沉淀；加PBS清洗， 100,000g 70 min

八戒在五湖 · 发表于 2017-4-24 15:59:27

北燕南飞发表于 2017-4-24 14:54
300g 10min，取上清；2,000g 10min，取上清； 10,000g 30min，取上清； 100,000g 70 min，取沉淀；加PBS ...

康萨米达~

afra · 发表于 2017-5-9 16:58:59

hzangs 发表于 2017-4-18 16:59
这个可能和细胞系本身有关，也跟你使用的染料有关。脏东西可能是染料里的。我是洗一次到两次一般一次 ...

请问一下您超离后能看到沉淀吗

hzangs · 发表于 2017-5-9 17:49:37

afra 发表于 2017-5-9 16:58
请问一下您超离后能看到沉淀吗

可以的。非常少非常小的沉淀。不容易发现

步步唧唧 · 发表于 2017-5-9 19:31:19

hzangs 发表于 2017-5-9 17:49
可以的。非常少非常小的沉淀。不容易发现

问一下每次提取要多少癌细胞上清？我一般用30--40ml，最后提出来也就一点儿，200ul重悬，觉得量太少，实验室离心机转子配套管子太小了。

弹珠1253 · 发表于 2017-5-10 21:42:39

小白请指教~请问下是否需要0.22 um微孔滤膜过滤呢？需要的话在第几步比较合适呢？

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

站长推荐 /1