请教各位大神！！提取间充质干细胞外泌体遇到的问题

Jayden · 发表于 2018-10-5 20:55:33

本人根据2006年提取那篇外泌体文献提取外泌体，用间充质干细胞200ml上清提取外泌体，最后一步离心后看不到沉淀，然后用200ul的PBS反复冲管壁，得到200ul的重悬液，哪去测粒径，显示浓度太稀，测出的结果不稳定，然后wb也没做出结果，电镜还没做。第二次用200ml上清提取的时候在第一次100000g*70min看到了沉淀，没有继续第二次100000G*70min ,并用200ulPBS重悬，拿去测粒径，结果显示粒径平均值在140nm左右，小于100nm的粒子很少。

请教各位大神，是我的上清里面小于100nm的外泌体很少吗？大部分是140nm的细胞外囊泡？

hzangs · 发表于 2018-10-9 09:56:52

Jayden 发表于 2018-10-8 23:17
我在第2次100000g*70min超离完以后把离心管拿出来，在灯光下也没有看到沉淀，用的是Beckman的70Ti的转子 ...

没啥问题。 NTA数据不同细胞系来源的外泌体粒径略有差异。 140nm可接受。写文章的时候可以考虑称之为 EV 或者 small EV（sEV）

hzangs · 发表于 2018-10-6 10:54:03

间充质干细胞的细胞外囊泡释放量很大。超离后不要倒上清。要用移液器一点点小心翼翼的去掉上请。

gengshikun123 · 发表于 2018-10-6 15:26:00

间充质干细胞的细胞外囊泡释放量很大。超离后不要倒上清。要用移液器一点点小心翼翼的去掉上请。

caocao · 发表于 2018-10-8 15:35:07

测粒径是用NTA吗，一般这种情况下粒径是会偏大的，140nm应该也正常吧，一般MSC外泌体会很多的

Jayden · 发表于 2018-10-8 23:17:01

hzangs 发表于 2018-10-6 10:54
间充质干细胞的细胞外囊泡释放量很大。超离后不要倒上清。要用移液器一点点小心翼翼的去掉上请。 ...

我在第2次100000g*70min超离完以后把离心管拿出来，在灯光下也没有看到沉淀，用的是Beckman的70Ti的转子，固定角转子，在离心之前在沉淀位置标记了的，用的是一次性的超速离心管，吸上清是用20ml针筒吸的，没有倒。您看我140nm粒径的分析报告能用吗？

Jayden · 发表于 2018-10-8 23:18:19

caocao 发表于 2018-10-8 15:35
测粒径是用NTA吗，一般这种情况下粒径是会偏大的，140nm应该也正常吧，一般MSC外泌体会很多的 ...

是用的NTA,您觉得140nm粒径能用吗？

caocao · 发表于 2018-10-10 22:24:12

我觉得能用的，NTA检测粒径本身就是偏大的

Jayden · 发表于 2018-10-11 20:51:43

hzangs 发表于 2018-10-9 09:56
没啥问题。 NTA数据不同细胞系来源的外泌体粒径略有差异。 140nm可接受。写文章的时候可以考虑称之 ...

好的，谢谢您的解答

Jayden · 发表于 2018-10-11 20:52:15

caocao 发表于 2018-10-10 22:24
我觉得能用的，NTA检测粒径本身就是偏大的

好的，谢谢

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