想统计下大家用超速离心时一次用多少量的细胞上清才够用

丫丫

Johnny 发表于 2016-8-27 16:45
细胞上清不能冻存提取外泌体

请问细胞上清不能冻存提取外泌体仅仅是因为得率少吗？还是说冻存会有什么影响？

故人老

kellyqhqh2002 发表于 2017-5-26 14:42
用试剂盒提取出的外泌体够用吗？我们的合作伙伴是用超离的方法，每次用6个离心管，每个离心管大概30ml。他 ...

我想问问肉眼可以看见管壁的沉淀物吗?

lc210311

向大神请教下，超离提外泌体时用来洗和重悬的pbs，需要特别处理过的吗？用培源生物的普通pbs行吗？

peggy4598690

wangxw 发表于 2015-11-8 18:01
滤掉直径过大的微泡及其他干扰物

想请问楼主，0.22um过滤主要在哪个步骤进行? 是第一次超离后，PBS resuspend之后就过滤，然后进行最后一次的超离吗? 这样会不会损失很多外泌体? 感激不尽!

wchuanlin

刚入门的新手，问一下你们超速离心法从血浆中提外泌体都是参考的那篇文献啊，能给个protocol吗，谢谢

YOUYOU2017

楼主最好加上细胞类型吧

yangdudu

楼主是否可以统计超速离心方法需要多少血液？谢谢你。

滴哩嘟噜1217

我用的是293T细胞，培养收集培养基，准备超速离心制备外泌体？现目前不解的问题有三：
1、正常培养细胞密度到达80%左右之后，必须得换无外泌体的血清培养基，是否可以直接用OPTI-MEM培养基?
2、我们用的超速离心机是beckman的，一次最多6^38.6ml,收集培养基》200ml，你们一般是怎么保存的呢？
3、电镜分析的时候你们是用的什么电镜呢？对样品制备有什么要求呢？有具体的步骤分享吗？谢谢

外泌体怎么ti

这个是不是跟细胞数量有关？

a969539915

luckkit 发表于 2015-4-24 12:38
另外，请教一下，俺是收集上清后直接2000g 30min,然后0.22um过滤，10e4 30min, 10e5 2hrs, 开始没有300g 10 ...

应该是为了去掉还没死的细胞和细胞碎片，毕竟外泌体也是磷脂双分子层结构跟细胞膜相似，可能会对后期定量造成影响。