PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

pkuaction · 发表于 2016-5-27 08:59:06

本人外泌体新手，请教您一个小问题：第7步通过PEG6000沉淀低速离心收集后加入ＰＢＳ重悬后，超高速离心的目的是什么，效果怎么样？发现ＳＢＩ与ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ的提取试剂盒一般都没有最后一步，请楼主指教。本人实验室没有超速离心机

hzangs · 发表于 2016-5-27 09:55:10

pkuaction 发表于 2016-5-27 08:59
本人外泌体新手，请教您一个小问题：第7步通过PEG6000沉淀低速离心收集后加入ＰＢＳ重悬后，超高速离心的目 ...

最后一步的目的是去除杂蛋白。沉淀法容易带杂蛋白下来，最后用PBS洗一下

katuysha · 发表于 2016-5-30 13:09:36

hzangs 发表于 2016-5-24 17:57
高压灭菌，然后 0.22um的滤器再过滤除去PBS里的颗粒。

谢谢楼主的回复，

！

hzangs · 发表于 2016-5-30 13:13:38

katuysha 发表于 2016-5-30 13:09
谢谢楼主的回复，！

太可气了

pytruth · 发表于 2016-5-31 16:01:44

楼主，想咨询一下，从细胞上清液提取小囊泡，怎么知道这个细胞外泌体分泌的多不多呢？如何确定需要用多少毫升的上清液来提取外泌体？另外就是这个PEG法提取效果和用试剂盒提取相比怎么样呢？

hzangs · 发表于 2016-5-31 17:39:33

pytruth 发表于 2016-5-31 16:01
楼主，想咨询一下，从细胞上清液提取小囊泡，怎么知道这个细胞外泌体分泌的多不多呢？如何确定需要用多少毫 ...

细胞释放外泌体的量多不多只能通过自己做实验逐渐尝试。一般分泌量中等的细胞系使用60ml上清提外泌体是可以的。 PEG法提取效果和沉淀试剂盒差不多，但相比超速离心分离还是差了些。

Mars · 发表于 2016-5-31 19:56:30

hzangs 发表于 2016-5-27 09:55
最后一步的目的是去除杂蛋白。沉淀法容易带杂蛋白下来，最后用PBS洗一下 ...

问一下，你在用100000g超速离心前要把原先细胞上清和PEG混合液先浓缩一下吗

hzangs · 发表于 2016-6-1 08:19:27

Mars 发表于 2016-5-31 19:56
问一下，你在用100000g超速离心前要把原先细胞上清和PEG混合液先浓缩一下吗 ...

是将Peg沉淀下来的东西 PBS重悬，然后超离

Mars · 发表于 2016-6-1 09:33:17

hzangs 发表于 2016-6-1 08:19
是将Peg沉淀下来的东西 PBS重悬，然后超离

是不是文献里说的3214g，1h，4℃后的沉淀然后PBS重悬超离

hzangs · 发表于 2016-6-1 10:34:09

Mars 发表于 2016-6-1 09:33
是不是文献里说的3214g，1h，4℃后的沉淀然后PBS重悬超离

嗯嗯。是的

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