PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

Mars 发表于 2016-5-31 19:56
问一下，你在用100000g超速离心前要把原先细胞上清和PEG混合液先浓缩一下吗 ...

是将Peg沉淀下来的东西 PBS重悬，然后超离

Mars

hzangs 发表于 2016-6-1 08:19
是将Peg沉淀下来的东西 PBS重悬，然后超离

是不是文献里说的3214g，1h，4℃后的沉淀然后PBS重悬超离

hzangs

Mars 发表于 2016-6-1 09:33
是不是文献里说的3214g，1h，4℃后的沉淀然后PBS重悬超离

嗯嗯。是的

pytruth

hzangs 发表于 2016-5-31 17:39
细胞释放外泌体的量多不多 只能通过自己做实验逐渐尝试。  一般分泌量中等的细胞系使用60ml上清提外泌体 ...

那就是说超速离心法分离出的外泌体是最多的了？如果用60ml的上清液提取出的外泌体够做些什么呢？WB或者电镜够吗？另外就是还想问问楼主，饥饿培养（培养基中不加入血清培养）会不会刺激细胞分泌更多外泌体呢？谢谢楼主

Mars

hzangs 发表于 2016-6-1 10:34
嗯嗯。是的

再问一下，文献里的shaking up to 30min怎么理解，你这样做了吗，对蛋白有影响吗

Mars

hzangs 发表于 2016-6-1 10:34
嗯嗯。是的

楼主问一下，最后一步超离，你离心几次，每次多久，谢谢

hzangs

Mars 发表于 2016-6-1 22:55
楼主问一下，最后一步超离，你离心几次，每次多久，谢谢

一次。 70min

Mars

hzangs 发表于 2016-6-2 17:00
一次。 70min

最后超离后用多少PBS重悬呢？

gracexiguan

hzangs 发表于 2016-4-26 14:25
这是用的细胞上清液。 没有拍电镜

请问用了多少细胞上清啊？谢谢

wangjkm

楼主，我想咨询一下，外泌体具体WB怎么跑？提取出来后用少量PBS重悬后，需要超声和BSA测浓度吗？还是直接加lording buffer和水上样呢？还是个新手，请多多见谅。