PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

shinerow · 发表于 2017-1-12 16:32:38

本帖最后由 shinerow 于 2017-1-13 08:46 编辑

hzangs 发表于 2016-4-26 21:19
是的。 cell1 超离分离的时候出了点问题，没有收到……

ALIX是CST的 CD63 来自proteintech. ...

楼主快看到我！CD63楼主做WB出来的条带是多大啊！根据楼主的推荐买了这两个抗体，CD63出来好多条带，ALIX做不出来。。。。还有为什么proteintech官网上的CD63做WB条带说是33KD，但是别的公司大多都是53KD呢~~~

wpp326180 · 发表于 2017-1-18 10:20:50

hzangs 发表于 2016-4-27 17:46
PEG+超速离心清洗这个方法还可以。
如果你用一个十几毫升或者几十毫升PBS的体系进行清洗这一步的话，结 ...

请问你说的是超离后用十几毫升的PBS重悬吗？我也是这个方法，WB跑的结果不好，我是血清外泌体跑的CD9

wpp326180 · 发表于 2017-1-18 10:24:00

lenoch 发表于 2016-5-11 12:49
我用的是0.22的，个人感觉会使exosome更纯一些，至少220nm以上的都滤掉了。会使你的电镜和nanosight更好 ...

群主，请问你在哪个城市，我想问问哪有nanosight

kao3234659 · 发表于 2017-1-22 20:21:24

PEG沉淀的时候需要放在转子上吧，静静的放在那里应该不行吧？还有你在做WB 时，是用了等体积还是等量的蛋白？

nick_a19 · 发表于 2017-3-3 22:17:26

这种方法提取的外泌体生物活性还保留了吗可以被细胞摄取吗

hzangs · 发表于 2017-3-5 13:22:01

nick_a19 发表于 2017-3-3 22:17
这种方法提取的外泌体生物活性还保留了吗可以被细胞摄取吗

你可以参考一下这篇原文。他们有分析过外泌体生物活性，在他们的结果来看不影响

xiaojinyuhen · 发表于 2017-3-8 17:02:02

谢谢版主大大，请问你跑WB用BCA定量细胞和外泌体定量成一样的吗？因为没看到您的actin或者tublin。而且PEG会有很多杂蛋白，即使定量成相同的量，可能由于杂蛋白的影响，外泌体的样本里外泌体的浓度还是很低，造成的WB结果反而是CD63在细胞的样本反而更多。

hzangs · 发表于 2017-3-8 18:07:27

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-8 17:02
谢谢版主大大，请问你跑WB用BCA定量细胞和外泌体定量成一样的吗？因为没看到您的actin或者tublin。而且PEG ...

我的图是定量之后上相同量的蛋白跑WB的

dangerous517 · 发表于 2017-3-21 22:12:51

版主好人，我刚接触外泌体，想请问您，如果我想让提取出的外泌体共培养细胞该怎么操作？是把pbs重悬后的外泌体悬液混到培养基中混匀再一起加入培养皿吗？还是该怎么操作？

hzangs · 发表于 2017-3-21 23:24:38

dangerous517 发表于 2017-3-21 22:12
版主好人，我刚接触外泌体，想请问您，如果我想让提取出的外泌体共培养细胞该怎么操作？是把pbs重悬后的 ...

提取出的外泌体 PBS重悬，加到共培养的细胞上清中即可

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