PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

arsenal-xie · 发表于 2017-3-21 23:30:13

hzangs 发表于 2016-7-28 21:30
我用的巨噬细胞上清大概10ml 巨噬细胞囊泡释放量很大的。

没有裂解，直接loading 煮煮就跑了 ...

请问你是用的多少X的loading buffer，因为上清提取的蛋白浓度就不高。

hzangs · 发表于 2017-3-22 13:49:44

arsenal-xie 发表于 2017-3-21 23:30
请问你是用的多少X的loading buffer，因为上清提取的蛋白浓度就不高。

1x

dangerous517 · 发表于 2017-3-23 12:23:00

版主好人，我也用的abcam的tsg101抗体，请问你稀释比例是多少

dangerous517 · 发表于 2017-3-23 12:27:11

请问版主，提取出外泌体用pbs重悬后不加裂解液裂解能使外泌体中的蛋白释放出来吗？还有就是不需要加蛋白酶抑制剂吗？

hzangs · 发表于 2017-3-23 14:03:51

dangerous517 发表于 2017-3-23 12:27
请问版主，提取出外泌体用pbs重悬后不加裂解液裂解能使外泌体中的蛋白释放出来吗？还有就是不需要加蛋白酶 ...

不加裂解液的话直接用loading 煮一煮也可以。 loading里面有破膜剂只是用lysis 裂一下可能效果会更好

dangerous517 · 发表于 2017-3-23 14:59:13

hzangs 发表于 2017-3-23 14:03
不加裂解液的话直接用loading 煮一煮也可以。 loading里面有破膜剂只是用lysis 裂一下可能效果 ...

那蛋白酶抑制剂也不加？

hzangs · 发表于 2017-3-23 21:17:30

dangerous517 发表于 2017-3-23 14:59
那蛋白酶抑制剂也不加？

没有加

dangerous517 · 发表于 2017-3-24 12:01:54

版主好人，请问如果我想用外泌体去处理细胞，将细胞种入六孔板后是直接加入含有外泌体悬液的培养基培养还是，先用普通培养基把六孔板中的细胞培养到一定密度后换液成含外泌体悬液的培养基继续培养？

hzangs · 发表于 2017-3-26 17:18:12

dangerous517 发表于 2017-3-24 12:01
版主好人，请问如果我想用外泌体去处理细胞，将细胞种入六孔板后是直接加入含有外泌体悬液的培养基培养还是 ...

一般细胞贴壁后第二天加入外泌体

xiaojinyuhen · 发表于 2017-3-27 10:34:30

版主能问下你这个型号抗体 CD63的分子量吗，有的文献是在55左右，有的在33左右，很迷茫啊谢谢啦

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