PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

dangerous517

请问版主，提取出外泌体用pbs重悬后不加裂解液裂解能使外泌体中的蛋白释放出来吗？还有就是不需要加蛋白酶抑制剂吗？

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-23 12:27
请问版主，提取出外泌体用pbs重悬后不加裂解液裂解能使外泌体中的蛋白释放出来吗？还有就是不需要加蛋白酶 ...

不加裂解液的话  直接用loading 煮一煮  也可以。  loading里面有破膜剂    只是用lysis 裂一下 可能效果会更好

dangerous517

hzangs 发表于 2017-3-23 14:03
不加裂解液的话  直接用loading 煮一煮  也可以。  loading里面有破膜剂    只是用lysis 裂一下 可能效果 ...

那蛋白酶抑制剂也不加？

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-23 14:59
那蛋白酶抑制剂也不加？

没有加

dangerous517

版主好人，请问如果我想用外泌体去处理细胞，将细胞种入六孔板后是直接加入含有外泌体悬液的培养基培养还是，先用普通培养基把六孔板中的细胞培养到一定密度后换液成含外泌体悬液的培养基继续培养？

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-24 12:01
版主好人，请问如果我想用外泌体去处理细胞，将细胞种入六孔板后是直接加入含有外泌体悬液的培养基培养还是 ...

一般细胞贴壁后  第二天加入外泌体

xiaojinyuhen

版主能问下你这个型号抗体 CD63的分子量吗，有的文献是在55左右，有的在33左右，很迷茫啊 谢谢啦

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-27 10:34
版主能问下你这个型号抗体 CD63的分子量吗，有的文献是在55左右，有的在33左右，很迷茫啊 谢谢啦 ...

cd63 有糖基化修饰   不同细胞大小不同

dangerous517

版主好人，我是从上清培养基中提外泌体，请问是完全培养基培养48小时后换成无exo培养基继续培养48小时后收集上清培养基，还是直接用无exo培养基直接培养48小时后收集上清培养基？

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-27 20:17
版主好人，我是从上清培养基中提外泌体，请问是完全培养基培养48小时后换成无exo培养基继续培养48小时后收 ...

两种方法都可以。 直接用无外泌体的含血清培液培养收取   是比较常见的方法。