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 楼主| 发表于 2016-10-9 10:14:26 | 只看该作者
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:07
都用过,比较推荐超离,杂质比试剂盒的要少很多,而且很适合大批量提取 ...

大神,你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗?具体转速 时间能透露一下吗?不胜感激!
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发表于 2016-10-9 10:16:10 | 只看该作者
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:08
我超离之后还是有沉淀的,但是电镜下看不到,染色也染不出来....已疯..... ...

同情你,超离完有再洗一遍吗?
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 楼主| 发表于 2016-10-9 10:19:00 | 只看该作者
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:16
同情你,超离完有再洗一遍吗?

再洗一遍?具体指的是哪一步,用pbs把沉淀洗一下之后再离心吗?
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发表于 2016-10-9 10:19:29 | 只看该作者
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:14
大神,你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗?具体转速 时间能透露一下吗?不胜感激!{ ...

前面是一样的,后面是110000g 70min
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发表于 2016-10-9 10:20:18 | 只看该作者
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:14
大神,你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗?具体转速 时间能透露一下吗?不胜感激!{ ...

在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下
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 楼主| 发表于 2016-10-9 10:23:08 | 只看该作者
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:20
在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

没过滤过...我在文献上看到这一步的目的是为了除菌,有的文献上没有这一步,就没过滤过,请问这一步的作用还有什么呢?
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发表于 2016-10-9 11:16:01 | 只看该作者
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:23
没过滤过...我在文献上看到这一步的目的是为了除菌,有的文献上没有这一步,就没过滤过,请问这一 ...

就是第一次110000g 70min后用PBS重悬。过滤也是为了去除杂质,可以尽量去除直径大的囊泡和其他一些物质
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 楼主| 发表于 2016-10-10 09:02:11 | 只看该作者
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 11:16
就是第一次110000g 70min后用PBS重悬。过滤也是为了去除杂质,可以尽量去除直径大的囊泡和其他一些物质 ...

好的,明白了,我试试,谢谢大神
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发表于 2016-10-10 11:28:23 | 只看该作者
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:20
在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

最后用PBS重悬也是一个问题。文献上说用20微升到50微升的PBS重悬,但这么少的液体加入进去,实在是大海捞针,怎么重悬,最后吸出的液体甚至超过了100微升,因为原本管壁上就有剩余的液体。
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发表于 2016-10-10 11:29:22 | 只看该作者
今日事今日毕 发表于 2016-10-10 09:02
好的,明白了,我试试,谢谢大神

楼主,使用超速离心,最后的pellet能看能到吗?我的完全是看不到的
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