麻烦大神们鉴定一下电镜图

pytruth

hzangs 发表于 2016-11-1 17:51
第一次不要吸太干净。   你很可能把沉淀给扔掉了……  所以你第一次能看到沉淀，洗一次就看不到了  o(╯ ...

好的。请问用超滤管浓缩细胞培液再超离对外泌体得率有影响吗？我看有的文献超离转速更高，超离时间也长，超离的时间和转速提高一些会不会能提高外泌体得率？

hzangs

pytruth 发表于 2016-11-1 21:50
好的。请问用超滤管浓缩细胞培液再超离对外泌体得率有影响吗？我看有的文献超离转速更高，超离时间也长， ...

浓缩细胞培液后  细胞培液会变粘稠，反而不容易超离得到外泌体。 而提高转速和时间会不会提高得率，我没有试过，但理论上 不会，因为超离已经把所有的外泌体都超下来了，哪里还有外泌体。。。

pytruth

hzangs 发表于 2016-11-2 11:36
浓缩细胞培液后  细胞培液会变粘稠，反而不容易超离得到外泌体。 而提高转速和时间会不会提高得率，我没 ...

请问师兄有尝试过浓缩了细胞培液之后再超离吗？
是说45ml上清液直接离心要比浓缩后再超离得到的外泌体要更多？
我浓缩完了感觉细胞培液并没有很粘稠，用的是100kd的超滤管，不知道是不是管子用的有问题？

hzangs

pytruth 发表于 2016-11-4 15:15
请问师兄有尝试过浓缩了细胞培液之后再超离吗？
是说45ml上清液直接离心要比浓缩后再超离得到的外泌体要 ...

100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘稠

pytruth

hzangs 发表于 2016-11-4 16:18
100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘 ...

好的，谢谢！

katekitekite

pytruth 发表于 2016-11-6 15:00
好的，谢谢！

100KD的浓缩可以  可以把很多杂蛋白去掉  所以液体不会变的异常粘稠   我浓缩后用磁珠提纯  量是比较少 不过外泌体还是有的  电镜可以看到   直接样品滴到铜网上   吸附一会  滤纸吸干后 负染色  样品不用固定  

katekitekite

hzangs 发表于 2016-11-4 16:18
100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘 ...

版主  你浓缩后  用浓缩液稍微吹洗滤膜了么  感觉BCA测浓度差好多

hzangs

katekitekite 发表于 2016-11-8 16:33
版主  你浓缩后  用浓缩液稍微吹洗滤膜了么  感觉BCA测浓度差好多

我是要吹洗的  

karen

版主好厉害!

katekitekite

hzangs 发表于 2016-11-8 19:15
我是要吹洗的

那以后我就一直吹洗吧  感觉浓度差了一个级别