exosome的小鼠实验我又要重新开始了

yy8651 · 发表于 2015-4-15 19:01:09

hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？

hzangs · 发表于 2015-4-16 12:20:45

向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

0.2 ug/ul 也不算低了，100ul 也有20ug了。

我打老鼠是从尾静脉带进去，每只在2-3ug

hzangs · 发表于 2015-4-16 12:23:23

yy8651 发表于 2015-4-15 19:01
你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？

我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000g超速离心8小时取上清。

effiezhang66 · 发表于 2015-4-24 10:33:12

求问是用盒子提的外体还是超离呢？

yy8651 · 发表于 2015-4-24 16:25:51

hzangs 发表于 2015-4-16 12:23
我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000 ...

你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗？

hzangs · 发表于 2015-4-26 14:08:53

yy8651 发表于 2015-4-24 16:25
你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗 ...

我没有检测过。这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室访问了半年的副研究员介绍给我的。他说那边一直使用这个方法。所以我就没多考虑直接拿来用了……

yy8651 · 发表于 2015-4-26 15:37:04

hzangs 发表于 2015-4-26 14:08
我没有检测过。这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室访问了半年的副研究员介绍给我的 ...

那是拿普通的血清直接离心11000g？不需要稀释吗？

hzangs · 发表于 2015-4-27 21:11:22

yy8651 发表于 2015-4-26 15:37
那是拿普通的血清直接离心11000g？不需要稀释吗？

我确实没有稀释。

wooway · 发表于 2015-5-27 20:49:13

想问一下你打的频率，剂量，还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。

hzangs · 发表于 2015-5-28 11:15:06

wooway 发表于 2015-5-27 20:49
想问一下你打的频率，剂量，还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。

每周两次，一次2-3ug ，连续打1个月打的小鼠

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exosome的小鼠实验 我又要重新开始了