外泌体处理细胞

向荣y

Johnny 发表于 2015-4-20 14:19
换48孔板试试？  还有多测几种可能对肿瘤细胞的影响，不要限于MTT，比如migration等其他肿瘤相关的指标 ...

嗯嗯 只是提出来的外体太少 不太够用的~

木瓜31

丁倩倩 发表于 2015-4-19 21:43
惜名师哥已经说得很详细了，你做干预的话不用裂解，直接用提取的exosome用BCA（或其他方法）测浓度就好， ...

不裂解直接用exosome重悬液测蛋白浓度，会比裂解后再测浓度低吗？

丁倩倩

我做的一般都是裂解后的浓度偏低

kadak007

丁倩倩 发表于 2015-6-25 16:28
我做的一般都是裂解后的浓度偏低

惜名在5楼回复时写到：“譬如，你有100ul PBS-exo，经裂解后测蛋白浓度，计算出这100ul PBS-exo共含有20ug蛋白（假设）。那么，这100ul PBS-exo加到六孔板中的1个孔（2ml培养基）中，即得到10ug/ml的外泌体干预浓度了。”
仔细读完后，感觉他还是分两步走的，同时提2批等量的exo，1批裂解后测浓度；明确浓度后，另一批处理细胞。

kadak007

惜名 发表于 2015-4-19 10:46
10ug/ml是指，每ml培养上清中加入10ug以蛋白衡量的外泌体。
这牵扯到一个外泌体浓度计算的问题，目前认为 ...

请教下，pbs-exo冻存于 --80℃，溶解后还能用来处理细胞吗？效果怎样呢？
谢谢~

惜名

kadak007 发表于 2015-6-25 23:44
请教下，pbs-exo冻存于 --80℃，溶解后还能用来处理细胞吗？效果怎样呢？
谢谢~ ...

可以的，效果和新提的差不多，但是你不能在-80度放太久。
我个人经验，2-4周问题不大的。因为每次提出来量都很少，所以很快就用完了
也有人说可放数月。。。

kadak007

惜名 发表于 2015-6-26 07:57
可以的，效果和新提的差不多，但是你不能在-80度放太久。
我个人经验，2-4周问题不大的。因为每次提出来 ...

处理细胞前，exo裂解后BCA测浓度，exo不裂解直接测浓度，这两种做法各有什么讲究吗?

kadak007

你好，请教下，做exo处理细胞时，每个孔里加多少细胞合适呢？总共需达到多大体积比较好呢？
譬如，25cm2规格培养瓶铺满时，细胞数大概是4-5*10^6，将这些细胞重悬于3ml的培养基，取多少加到孔里合适呢？

惜名

kadak007 发表于 2015-6-30 15:42
处理细胞前，exo裂解后BCA测浓度，exo不裂解直接测浓度，这两种做法各有什么讲究吗?  ...

是否需要裂解这个问题我看到论坛里有人讨论过。。。
这个我也搞不清楚，反正我每次都是裂解的，不管是测浓度还是跑western

惜名

kadak007 发表于 2015-6-30 16:35
你好，请教下，做exo处理细胞时，每个孔里加多少细胞合适呢？总共需达到多大体积比较好呢？
譬如，25cm2规 ...

我做HUVEC（人脐静脉内皮细胞）的炎症反应，目测细胞密度50-95%的范围内都可以。
25cm2的瓶子面积为六孔板的2倍多一点，我手头的资料提示25cm2瓶子可以获得5*10^6个细胞，六孔板大约是2.5*10^。这样计算你1个瓶子分2个孔还是比较合适的。
当然，你能先摸一下条件是最好的。