外泌体RNA提取

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-5 10:50
这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。  qiagen抽提膜泡内RNA的kit  我一个朋友使用过了，出来的量 ...

太感谢了，这个信息对我太有帮助了，谢谢分享~~~我之前尝试性提了两个，一个2.3ng/ul，比值1.97；一个65.6ng，比值1.48。正苦恼为什么比值这个样子。谢谢~

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-5 10:50
这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。  qiagen抽提膜泡内RNA的kit  我一个朋友使用过了，出来的量 ...

请问你这边的经验就是1ml TRIzol，然后室温放置多久？常规5min？谢谢。

hzangs

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 14:22
太感谢了，这个信息对我太有帮助了，谢谢分享~~~我之前尝试性提了两个，一个2.3ng/ul，比值1.97；一个65. ...

后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

旋转的尾音

hzangs 发表于 2016-4-5 18:17
后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

明白了，谢谢分享

wjy

hzangs 发表于 2016-4-5 18:17
后边的  65.6ng 比值1.48  和我之前抽提到的应该比较类似。

是的  5min

求问，求帮助，新手用TRIZOL提的外泌体总RNA也是这种情况，浓度比你好低，吸光度值1.48，根据吸光度值来看是不是蛋白和酚类污染啊？怎么解决啊？浓度还低。我的提的RNA想做二代测序，这种样品质量估计不行啊。

hzangs

wjy 发表于 2016-7-23 15:27
求问，求帮助，新手用TRIZOL提的外泌体总RNA也是这种情况，浓度比你好低，吸光度值1.48，根据吸光度值来 ...

这个好像没什么好办法。  能做的就是加大外泌体的起始量  然后可以提高最后抽提出的RNA的量  质量可能也会好一点

wjy

hzangs 发表于 2016-7-24 17:15
这个好像没什么好办法。  能做的就是加大外泌体的起始量  然后可以提高最后抽提出的RNA的量  质量可能也 ...

恩恩 ，我是刚开始做提RNA ,量是有点小，想先摸摸条件试一试。那污染那？看吸光度1.48不是蛋白污染吗？换成试剂盒提取效果会好吗？

hzangs

wjy 发表于 2016-7-25 09:25
恩恩 ，我是刚开始做提RNA ,量是有点小，想先摸摸条件试一试。那污染那？看吸光度1.48不是蛋白污染吗？换 ...

http://www.exosome.com.cn/forum. ... amp;page=11#pid7725  你可以看看这个贴子里的protocol

1.48 有点太低了   估计换kit  意义也不大。目前外泌体抽提RNA 好像没有见过效果很好的

wjy

hzangs 发表于 2016-7-25 09:41
http://www.exosome.com.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=886&page=11#pid7725  你可以看看这个贴子里的 ...

恩恩好的谢谢你的帮助。

wjy

hzangs 发表于 2016-7-25 09:41
http://www.exosome.com.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=886&page=11#pid7725  你可以看看这个贴子里的 ...

想像你你咨询一下，你外泌体提取的RNA有跑RNA电泳吗？有18s和28s的条带吗？我和细胞同时提取的总RNA,细胞内有18s和28s的核糖体RNA ,外泌体中啥条带都没有。