菜鸟求助细胞培养上清SBI 试剂外泌体分离

effiezhang66 · 发表于 2015-4-23 11:06:19

大神我是用的细胞培养基，SBI的盒子，10ml培养基+2ml提取液过夜后，分到1.5mlEP管里离心，因为觉得SBI说明书的转速太低，所以最后会加一次10000g，希望EV可以贴在离心管壁，用了pbs重悬，现在想把多个小管合在一起，所以想浓缩。谢谢！

effiezhang66 · 发表于 2015-4-23 11:15:38

是的大神，因为后续想treat细胞用，并且有没有好的测浓度的方法啊？除了BCA

effiezhang66 · 发表于 2015-4-23 11:23:05

那如果PBS重悬后要提蛋白怎么办呢？10000离心后加RIPA会损失很多吧？55555555

yy8651 · 发表于 2015-4-23 17:05:52

可以试试浓缩细胞培养液

宝莲 · 发表于 2015-4-23 19:18:00

我用life的试剂盒，20ml无血清的细胞培养上清提取也没有沉淀，做电镜可以看到少量外泌体。

muzi.csu · 发表于 2015-4-27 12:43:27

好像可以收集大量细胞上清，用超滤离心管浓缩一下，再用试剂盒分离外泌体。我之前用5,10,15ml细胞上清都没看见沉淀，后来收集了70ml浓缩后再分离就看到沉淀了...

六月の雪 · 发表于 2015-4-29 14:47:22

muzi.csu 发表于 2015-4-27 12:43
好像可以收集大量细胞上清，用超滤离心管浓缩一下，再用试剂盒分离外泌体。我之前用5,10,15ml细胞上清都没 ...

求指教，如何浓缩的，用的什么规格的超滤离心管，另外，你的Exo-Free的SBI血清是多少钱买的啊？

yy8651 · 发表于 2015-4-29 16:28:24

六月の雪发表于 2015-4-29 14:47
求指教，如何浓缩的，用的什么规格的超滤离心管，另外，你的Exo-Free的SBI血清是多少钱买的啊？ ...

据有人说250ml 7K左右

muzi.csu · 发表于 2015-5-12 15:54:34

六月の雪发表于 2015-4-29 14:47
求指教，如何浓缩的，用的什么规格的超滤离心管，另外，你的Exo-Free的SBI血清是多少钱买的啊？ ...

我买的是3KD的 15ml的超滤管。exo-free好像是将近2000元买的小规格

daidiu2003 · 发表于 2015-5-18 22:34:17

请问“用SBI公司的Exoquick-TC分离肿瘤细胞培养上清中的外泌体”，Exoquick-TC有说明书吗？是按着说明书操作就好？可以跟你请教点详细的实验步骤不？我们也是实验条件有限，老板胸怀大志。。。好担心不能毕业~~谢谢你了~

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