PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

我是外泌体 发表于 2017-8-12 11:49
你好 ，你这是做到细胞培养液实验，想问一下您用过血清做过实验吗

没有尝试过

papatrick

想请问一下，有必要在培养细胞时都使用去除exosome的培养基吗，还是在要提取48h 前使用无exosome的培养基即可

ij1211

请问楼主你超离过后能看到离心管底部有沉淀吗？我用PEG沉淀后10000g离心时是可以看到底部沉淀的，但超离110000g后看不到底部沉淀，然后测蛋白浓度时好像没有，请问这是我哪一步错了吗？

hzangs

ij1211 发表于 2017-9-4 13:45
请问楼主你超离过后能看到离心管底部有沉淀吗？我用PEG沉淀后10000g离心时是可以看到底部沉淀的，但超离110 ...

起始样品太少，或者在超离过程中弄丢了

huzheng2006

楼主，你好，麻烦问一下超离结束后，外泌体直接加入1Xloading buffer，那如何BCA定量蛋白含量?另外，1Xloading buffer一般加多少？上样量大概多少体积，其中蛋白量一般多少？谢谢！

夏天

淘芝夭夭 发表于 2016-5-9 09:58
我们差速超离时基本没看到任何沉淀

请问第二次纯化的时候加了PEG还要过夜吗？

liwx

如果是10000g过后，用10000g的转速PBS洗涤，这种方法是否也可以去除杂蛋白？

hzangs

liwx 发表于 2018-3-28 01:15
如果是10000g过后，用10000g的转速PBS洗涤，这种方法是否也可以去除杂蛋白？

只能去除部分杂蛋白。  目前没有任何办法完全去除外泌体样品中的杂蛋白。只能是尽可能减少

tianjing0312

楼主，您好，我是用超高速离心的方法，300g 10‘ 1200g 20’ 10000g 30‘ 然后 110000g 90’，但是110000g离心完并没有看到任何沉淀。用的NSC神经干细胞，两个离心管共28毫升。请问这个是怎么回事呢？
还有就是最后还是用pbs重悬了管底（共100ulpbs），那么直接加入5xloading buffer 煮沸上样就可以了吗？如果测浓度的话应该怎么测呢？培养基的浅红色会不会影响BCA定量的吸光值呢？
谢谢您

805580262

您好请问如果提取血浆外泌体的话，得率怎么呢？