SBI试剂盒提取培养液及血清外泌体protocol

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-4-10 13:34
我用的也是1ml的量，WB一个条带都没有。应该是exosomes的量太少，不过我用的血浆样品年代比较久远，不知 ...

请问下，其他来源外泌体的标志蛋白 WB验证 有出条带嘛？

芮苏遥

zergbloody 发表于 2017-4-15 10:54
您好，请问血浆提取的步骤和血清有什么区别呢？我刚开始做，想用SBI的试剂提取血浆外泌体。谢谢！ ...

linvitrogen有针对CM,plasma，serum 的exosome提取试剂盒。最近在做血浆外泌体的提取

katuysha

芮苏遥 发表于 2017-4-18 12:42
请问下，其他来源外泌体的标志蛋白 WB验证 有出条带嘛？

kit沉淀完后，加一步洗脱，用大体积的PBS洗去杂蛋白，再离心收集，这样就可以用WB做出结果。只是这样会损失大量的外泌体。

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-4-18 17:34
kit沉淀完后，加一步洗脱，用大体积的PBS洗去杂蛋白，再离心收集，这样就可以用WB做出结果。只是这样会损 ...

是将试剂盒提取出的外泌体用PBS重悬，然后用10000g再次离心取沉淀的意思吗？请问下大概需要多少的量，谢谢~~~

katuysha

芮苏遥 发表于 2017-4-19 01:12
是将试剂盒提取出的外泌体用PBS重悬，然后用10000g再次离心取沉淀的意思吗？请问下大概需要多少的量，谢 ...

是的，PBS需要20-30ML，离心力越大越好。

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-4-19 14:13
是的，PBS需要20-30ML，离心力越大越好。

下次试试，非常感谢！

waimiti

katuysha 发表于 2017-4-18 17:34
kit沉淀完后，加一步洗脱，用大体积的PBS洗去杂蛋白，再离心收集，这样就可以用WB做出结果。只是这样会损 ...

请教一下您，如何洗脱，是1500g ,5min中离心之后再加PBS洗脱么？离心力和时间怎么定？谢谢

katuysha

waimiti 发表于 2017-11-7 01:34
请教一下您，如何洗脱，是1500g ,5min中离心之后再加PBS洗脱么？离心力和时间怎么定？谢谢 ...

就是在用kit得到你的最终沉淀之后啊，离心力是越大越好，同理，时间也是越久越好。

guodier

感谢 mark

JKF

血清提取的话，也是要离心30分钟吧