外泌体处理细胞

kadak007

惜名 发表于 2015-7-1 08:26
我做HUVEC（人脐静脉内皮细胞）的炎症反应，目测细胞密度50-95%的范围内都可以。
25cm2的瓶子面积为六孔 ...

非常感谢版主，完全取代了我老板的地位...... 我打算拿大鼠肌细胞试下
你做的实验 每个孔里exo加多少微克起步呢？有没有一个比较大众化的浓度梯度？

惜名

kadak007 发表于 2015-7-2 00:43
非常感谢版主，完全取代了我老板的地位...... 我打算拿大鼠肌细胞试下
你做的实验 每个孔里exo加 ...

我用SBI提取的exo，得率之高令人乍舌。。。
所以我给出的浓度可能不是很准确，混杂了一些细胞培养液中的蛋白，供你参考吧。
大约每孔加50ul PBS-exo悬液，每ul约0.2ug。

kadak007

惜名版主，用exo处理细胞，你有没有想过用小鼠源的细胞？毕竟后续功能实验时都得用小鼠的；
还是说，如果exo是人源的，那么处理的细胞也必须是人源的，功能实验时，不可能拿人做，只好用小鼠。
有没有纠结过这个问题？

惜名

kadak007 发表于 2015-7-3 16:23
惜名版主，用exo处理细胞，你有没有想过用小鼠源的细胞？毕竟后续功能实验时都得用小鼠的；
还是说，如果ex ...

有纠结过啊。。。
但是现实条件所限啊，人源的HUVEC是最常见、也是比较容易获得的。

如果做miRNA，其实人源和小鼠源序列几乎都是一样的
如果做蛋白，或许有点顾虑。
不过anyway，这是没办法的折中了。毕竟不求大paper，只求毕业。。。

P.S. 你要点回复我，我才能看到消息，否则我收不到你的提问。。。

kadak007

惜名 发表于 2015-7-3 16:40
有纠结过啊。。。
但是现实条件所限啊，人源的HUVEC是最常见、也是比较容易获得的。

呵呵，好的，感谢版主~

梦想照进现实

惜名 发表于 2015-4-19 10:46
10ug/ml是指，每ml培养上清中加入10ug以蛋白衡量的外泌体。
这牵扯到一个外泌体浓度计算的问题，目前认为 ...

是否有文献支持~求文献细读，谢谢！

惜名

梦想照进现实 发表于 2015-7-8 10:17
是否有文献支持~求文献细读，谢谢！

这篇Nature immunology <Exosomes mediate the cell-to-cell transmission of IFN-a-induced antiviral activity>，exo干预细胞基本都是用的5ug/ml；
这篇circulation <Circulating Exosomes Induced by Cardiac Pressure Overload Contain Functional Angiotensin II Type 1 Receptors>用的是exo粒子数定量。
这篇JACC <Plasma Exosomes Protect the Myocardium From Ischemia-Reperfusion Injury>同时用了粒子数和蛋白质量。

其实任何一篇关于exo的文章，你仔细去找找，大都能找到一些剂量。

梦想照进现实

谢谢！拜读

kadak007

惜名 发表于 2015-7-2 10:02
我用SBI提取的exo，得率之高令人乍舌。。。
所以我给出的浓度可能不是很准确，混杂了一些细胞培养液中的 ...

版主，请指导下，PBS-exo处理细胞，你一般让它们共同孵育多久呢？按小时算，还是按天算？

惜名

kadak007 发表于 2015-7-20 20:56
版主，请指导下，PBS-exo处理细胞，你一般让它们共同孵育多久呢？按小时算，还是按天算？ ...

这个恐怕得看你的exo通过什么途径发挥作用、以及你要检测什么。
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如果你推测exo可以通过膜表面蛋白作用，那么时间应该是很快的，只要exo和细胞接触就可以作用了。然后你如果要检测mRNA表达，数小时就可以了。如果做蛋白，那就得16-24小时。
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如果你推测exo是通过里面的miRNA作用，那么时间就得参照转染miRNA的了，例如，我看到的文献一般是在转染miRNA 36小时做检测。因为miRNA进到细胞还需要如靶序列结合、然后作用。